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求助HPLC高手，加入三氟乙酸后，atlantis T3柱有被损的迹象
求助HPLC高手，加入三氟乙酸后，atlantis T3柱有被损的迹象。我的化合物是醛，在图中蓝色的为两天前的chromatography，黑色的为今天的跑的，黑色的在保留时间18min的那个峰明显不是单峰。流动相是乙腈（0.1%TFA）和水（0.1%TFA，文献报道，走的梯度。柱子是waters的atlantis T3，我已经排除guard column的因素、仪器的因素、化合物的因素。
我想了解的是我的柱子对0.1%TFA耐受吗？在结束试验后，怎么清洗整个系统和柱子。还有哪些原因会导致出现不是单峰的情况。请分析高手不吝赐教！
那你用的什么牌子和型号的柱子
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三氟乙酸在HPLC中的应用
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求助：hplc 中使用三氟乙酸的注意事项
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这个帖子发布于12年零35天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要用它做流动相分析氨基酸，它的酸度有多强，使用时稳定吗?需要现配吗？请高手指点，谢！
不知道邀请谁？试试他们
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TFA易挥发，使用时需要密封良好，否则TFA浓度不准，对分离会有影响，重复性不能保证，最好现配。TFA是强酸，0.1%的TFA in water的pH大概是2。分析氨基酸，你用OPA柱前衍生么？OPA倒是不稳定的
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三氟乙酸酸性强，腐蚀性也强。就像那位兄台说的一样，保存时要注意密封。而且配制的时候，最好在通风厨里进行，因为三氟乙酸挥发性强。0.1％的三氟乙酸做流动相，比例不要太高，一方面伤柱子，另一方面基线不好。我以前用过，应该注意的地方，差不多就是这些，希望帮得上你。
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不知道你用什么检测器，如果你用的是紫外的话，可以用TFA，如果打算用MS的话，最好不用TFA，因为氨基酸极性大且热不稳定，如果上质谱一般选用ESI源，而通常所用TFA浓度（0.1％）具有较高的表面张力，不利于喷雾的形成，并且在气相中，TFA离子与肽的碱性基团形成离子对抑制电离，降低灵敏度，所以如果要用质谱的话，最好选用挥发性的酸，如甲酸或乙酸。
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对了，还有一点，最好选用进口得三氟乙酸，基线好很多的。
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0.1%的TFA in water的pH能到2????
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wangyw5191 编辑于
做peptide or protein mapping时候经常用到TFA,上面的朋友说了很多关于它酸性的内容.我只想提醒你,一定要配新鲜的流动相,因为TFA不稳定,容易被氧化,它的氧化物会在你的图谱中出现鬼峰的现象.我就遇到过类似的问题.
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wangyw5191 有个问题 0.1%无机强酸的ph值才是3 0.1%的TFA in water的pH能到2????呵呵你怎么算的pH3阿我算给你看：近似TFA密度与水相同（0.1% v/v 近似等于 0.1% m/m）以你说的无机盐酸为例, 36% HCl(质量分数) ，即 100 g浓盐酸溶液中有36g是HCl分子；查得此时盐酸密度：1.18g/ml，摩尔浓度：11.6mol/L（其实这两个知道一个就可以算出另一个）；1%的盐酸摩尔浓度为：11.6 / 36 = 0.322 mol/L0.1%盐酸摩尔浓度：0.0322 mol/LpH = - lg(0.0322) = - lg (3.22x10 -2) = - (-2+lg3.22) = 2 - lg3.22因为lg以10为底，为增函数，所以，lg3.22 & lg1 = 0so, pH = 2 - lg 3.22 & 2 就算我的假设v/v 等于 m/m欠妥保守起见，酸的浓度再减少一半，pH = - lg (0.0322/2) = lg2- lg (0.0322) = 0.3010 - (lg3.22 -2 ) = 2.3 - lg 3.22 lg 3.22 可以用换底公式估计lg 3.22 = log3.22 (3.22) / log 3.22 (10 )
≈ 1/log 3.22 (3x3)
≈ 1/ log 3 （3x3）
=0.5 所以，pH最高也不会超过1.8，呵呵由于TFA虽是强酸，但是应该没有盐酸强，所以pH2是合理的。如果还是不信，那就自己试试吧，add 1ml TFA into 1000ml water, 然后测pH。当然有人会说用计算器更快，没关系，仁者见仁。丁香园就是这样一个地方，大家想得都一样就没有必要来讨论了祝好！
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多谢 多谢是我理解错了按照你的计算 0.1%TFA的ph应当在2左右1000g水中有1g TFA摩尔浓度为1/114=0.0086 即ph=2.064
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wangyw5191 编辑于
没关系的阿，互相学习。你要不说，我也不会算的，算算心里更有底，理论联系实际。:) :) :)
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biosepq 呵呵你怎么算的pH3阿我算给你看：近似TFA密度与水相同（0.1% v/v 近似等于 0.1% m/m）以你说的无机盐酸为例, 36% HCl(质量分数) ，即 100 g浓盐酸溶液中有36g是HCl分子；查得此时盐酸密度：1.18g/ml，摩尔浓度：11.6mol/L（其实这两个知道一个就可以算出另一个）；1%的盐酸摩尔浓度为：11.6 / 36 = 0.322 mol/L0.1%盐酸摩尔浓度：0.0322 mol/LpH = - lg(0.0322) = - lg (3.22x10 -2) = - (-2+lg3.22) = 2 - lg3.22因为lg以10为底，为增函数，所以，lg3.22 & lg1 = 0so, pH = 2 - lg 3.22 & 2 就算我的假设v/v 等于 m/m欠妥保守起见，酸的浓度再减少一半，pH = - lg (0.0322/2) = lg2- lg (0.0322) = 0.3010 - (lg3.22 -2 ) = 2.3 - lg 3.22 lg 3.22 可以用换底公式估计lg 3.22 = log3.22 (3.22) / log 3.22 (10 )
≈ 1/log 3.22 (3x3)
≈ 1/ log 3 （3x3）
=0.5 所以，pH最高也不会超过1.8，呵呵由于TFA虽是强酸，但是应该没有盐酸强，所以pH2是合理的。如果还是不信，那就自己试试吧，add 1ml TFA into 1000ml water, 然后测pH。当然有人会说用计算器更快，没关系，仁者见仁。丁香园就是这样一个地方，大家想得都一样就没有必要来讨论了祝好！用它做ELSD问题大吗？它不稳定，那么多长时间内可以保持稳定，每进一次样品应该控制在多少分钟？谢谢！
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eatingpig 三氟乙酸酸性强，腐蚀性也强。就像那位兄台说的一样，保存时要注意密封。而且配制的时候，最好在通风厨里进行，因为三氟乙酸挥发性强。0.1％的三氟乙酸做流动相，比例不要太高，一方面伤柱子，另一方面基线不好。我以前用过，应该注意的地方，差不多就是这些，希望帮得上你。它做ELSD问题大吗？它不稳定，那么多长时间内可以保持稳定，每进一次样品应该控制在多少分钟？谢谢！
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xxb_6410 不知道你用什么检测器，如果你用的是紫外的话，可以用TFA，如果打算用MS的话，最好不用TFA，因为氨基酸极性大且热不稳定，如果上质谱一般选用ESI源，而通常所用TFA浓度（0.1％）具有较高的表面张力，不利于喷雾的形成，并且在气相中，TFA离子与肽的碱性基团形成离子对抑制电离，降低灵敏度，所以如果要用质谱的话，最好选用挥发性的酸，如甲酸或乙酸。它做ELSD问题大吗？它不稳定，那么多长时间内可以保持稳定，每进一次样品应该控制在多少分钟？谢谢！
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可以肯定地告诉你，TFA用ELSD检测没有问题，使用ELSD基线应该会更稳，ELSD检测前，TFA等流动相就挥发了，除非你的样品比流动相还容易挥发。:)且不受环境温度影响，避免了因甲醇/乙睛梯度浓度增加而产生TFA摩尔吸光度变化而产生的基线漂移，具有很高的灵敏度。TFA易挥发，不稳定我还没听说，密封良好的化，用1，2天是肯定没问题的。
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做peptide or protein mapping时候经常用到TFA,上面的朋友说了很多关于它酸性的内容.我只想提醒你,一定要配新鲜的流动相,因为TFA不稳定,容易被氧化,它的氧化物会在你的图谱中出现鬼峰的现象.我就遇到过类似的问题. --------一定要配新鲜的流动相,因为TFA不稳定,容易被氧化,它的氧化物会在你的图谱中出现鬼峰的现象能说的更明白些吗？？？
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三氟乙酸在做分析时，可以用醋酸代替，一般醋酸的含量为0.1%，三氟‘乙酸的酸性强于醋酸，故一般采用0.05%即可；有实践经验为证，但是，在做制备液相分离时，一般采用三氟乙酸作为酸性添加剂，原因是三氟乙酸的挥发性强，容易在减压状态下挥发除去，浓度同样是0.05%, 但值得注意的一点是，实际上三氟乙酸在用旋转薄膜回收时，是无法完全出去的，有实践为正，尽管含有0.05%三氟乙酸的空白流动相（不含任何样品）蒸干了，但一加少量水溶解，用pH试纸一测，一般为2-3，所以用减压回收法是除不净回收样品中的三氟乙酸的，这时，一般采用Sephadex LH-20来除去三氟乙酸是比较好的方法，用水装柱，加进样品（水溶或少量甲醇溶解），先用水冲柱，pH试纸监测，直至把酸全部洗去，再用甲醇冲柱，把所要的样品给洗下来，即可。
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