[液相色谱常见14个问题及其解决方法]&一、问：用hplc进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?关于漂移问题：1.&温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。2.&流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。3.&柱子未平衡好&[HPLC&液相色谱&进样器&柱子&柱子&流动相&极性]
一、问：用hplc进行分析时，保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决?
关于漂移问题：
1. 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。
2. 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。
3. 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。
关于快速变化问题：
1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定。
2. 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
3. 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。
二、问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?
1. 柱效要高
2. 热稳定性好
3. 化学惰性强
具体选择应注意：
1. 柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析。
2. 柱子内径。内径大小决定柱容量。
3. 液膜厚度。分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄。
4. 柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度。
5. 外涂层(柱体)的选择。
6. 另外还有仪器型号、分析对象等因素。
三、问：中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?
1. 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2. 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。
四、问：从那些方面可以简单判别子的热稳定性好坏?
1. 分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。
2. 理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定。
3. 柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。
4. 噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加。
5. 柱子的去活层，子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。
五、问：为什么内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响?
内的玻璃衬套主要有下列作用：
1. 提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。
2. 玻璃的惰性较不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。
3. 易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。
4. 可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。
从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。
六、问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么?
1. 进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。
2. 进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。
3. 在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。
4. 系统的进样垫、柱接头等地方漏气。
七、问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法。
1. 样品量不足，解决办法为增加样品量。
2. 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子。
3. 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器。
4. 检测器衰减太多。调整衰减即可。
5. 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数。
6. 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。
7. 检测池中有气泡。解决办法为排气。
8. 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。
9. 流动相流量不合适。调整流速即可。
10. 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
八、问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?
原因可能有：
1. 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理。
2. 比例阀失效，更换比例阀即可。
3. 泵密封垫损坏，更换密封垫即可。
4. 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法。
5. 系统检漏，找出漏点，密封即可。
6. 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。
九、问：做PGS/MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱?
聚合物，尤其是一些含氮，硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预柱可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱需经常更换。
十、问：我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么?
这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺(TEA)，将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。
十一、问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么?
柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因：
1. 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是的问题，若柱压仍高，再检查;
2. 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查;
3. 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池)。这时，如果柱压仍不下降，再检查;
4. 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
十二、问：高温毛细柱的使用寿命一般为多长?
毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外，在很大程度上取决于使用情况，如使用温度、样品状态，进样量等，如果在其使用温度范围内，样品干净，色谱柱不被污染的情况下，柱子寿命一般在2～3年之间。
十三、问：如毛细管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢复?是否可通过老化来解决?
根据柱污染程度可采取不同的方法来解决，如果污染不严重，污染物沸点不是太高，可通过老化来解决，但老化温度不可超过柱子的最高使用温度，且一般要较长时间(8～30)小时;如果污染较严重，或通过老化仍不能使柱性能恢复，那就必须采用溶剂清洗，通常是用5倍柱容积的溶剂(如正戊烷，二氯甲烷等)通过色谱柱。当然，清洗熔剂用的越多，对柱性能的损坏越大，清洗完后，在通载气老化一定时间，如果柱性能恢复，便可继续使用。
必须指出：只有交联柱才能清洗，对于非交联柱，清洗柱子会彻底失效，因为固定液被洗掉了，至于清洗用溶剂的选择，可参考说明书。
十四、问：BPX70毛细柱是否可用于GC/MS分析?
完全可以。BPX70为极性柱，使用温度范围宽(25～260℃)，程序升温可达290℃，流失低，适合于分析脂肪酸甲酯的的各种位置和几何异构体，药物异构体，碳水化合物等。因BPX70为交联柱，故用于GC/MS很稳定，污染后可清洗再生。
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高效液相色谱仪使用时遇到的问题
各位在使用高效液相色谱仪时都出现过什么惊险的问题啊
电脑死机....&&这个确实最悲剧:shuai:
我也有过，但是柱子没废
那是因为干的不彻底啊&&:jok:
请问如果跑完样品了，我不处理，仪器会以什么速度冲柱子捏
四元泵，A和B放乱了。。。。
凌乱了........
应该是按照你设定的那个速度在跑& &就是你跑样品的速度（如果是梯度的话就是最后的那个速度）
这事我干过，不过幸好没出什么问题
我遇到过类似的，本来我设定进3次样的，可适当第3次跑完我准备收工的时候，进样器自动手从容地抓起样品瓶，继续进样，场面十分诡异，所有人都惊呆了。。。。:rol:
柱子废了未必是师妹的原因吧。流动相完了机器会自保停止的根本不会对柱子造成影响
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随时随地聊科研& 有什么方法可以简单判断比例阀是否内漏，是否比例正常呢
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有什么方法可以简单判断比例阀是否内漏，是否比例正常呢
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有什么方法可以简单判断比例阀是否内漏，是否比例正常呢
比例阀故障外表很难直观的看出有木有故障，有什么方法可以简单判断比例阀是否内漏，是否比例正常呢，可以像武林高手那样，听音辨故障吗？
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做一个比例实验，例如流动相两项为：A——水，B——丙酮水溶液，把洗脱条件设置成台阶式梯度洗脱，观察色谱图就知道是否正常了。
注意：色谱图出来应该也是台阶式的
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这个不能百分百说明情况的吧？
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找个量筒和计时器，测测一定时间流出来的液体量对不对就可以了
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从流量上考虑也是一个方法，但量筒和计时器有一定的误差，不能精确的判定故障程度
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色谱图怎么会是台阶似的呢？不解，求解
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你去看下高效液相色谱检定规程中的梯度准确度检定就知道怎么回事了。
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我们上次也是怀疑比例阀的问题，就是测定一定流速，一定时间内流出液体的体积来判断的。
或者还有一个方法：
设定泵使用一个单独通路(A),打开Purge阀,流速5ml/min,提起其他溶剂瓶内的溶剂过滤头直至离开液面,观察这些通路(B,C,D)内的溶剂是否随着流动,正常时均不应流动.
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如果要准确，就是要称重了。
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如果是四通路的比例阀， 取4个25ml的量筒，分别加入25ml的甲醇，将四个进液管路分别放入四个装有甲醇的量筒中，分别设定流路的比例为A：0.25%，B：0.25%，C：0.25%，D：0.25%，设定流量为4ml/min（不接色谱柱），运行10min后，检查四个量筒中甲醇减少的体积是否相同，若不同，比例阀肯定坏了！但要看你的要求，如果你要求精度很高，用不同的溶剂，设定不同比例后收集流出液，并做气相分析比例是否于设定的比例一样！高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法 - 仪器教程 - 生物秀
标题: 高效液相色谱仪使用中常见问题及解决方法
摘要: 高效液相色谱(High Performance Liquid Chro—matographv．HPLC)是近3O年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离、分析技术。它既能用于微量组分的分析测定．又能用于大量的制备分离．灵活多样，应用范嗣已超过其它各种分离方法．高效液相色谱仪在使用过程中常会出……
② 打开Purge阀，使流动相不经过柱子，如果压力没有明显下降，则是过滤头堵塞。处理方法：将过滤头取
出．用1O％ 的异丙醇超声30min 如果压力降至690kPa以下．过滤头正常．再检查。③把色谱柱出口端取下，如果压力不下降，则是柱子堵塞。处理方法：如果是缓冲盐堵塞，则用95％ 的水冲至压力正常：如果是一些强保留的物质导致堵塞．则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常 假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降．则可考虑将柱子的进出口反过来接在上．用流动相冲洗柱子 这时．如果柱压仍不下降，只有换柱子人口筛板。但一旦操作不慎．很容易造成柱效下降．所以尽量少用
2．1．2 压力过低
压力过低的现象一般是由于系统泄漏．处理方法：寻找各个接口处．特别是色谱柱两端的接口．把泄漏的地方旋紧即可 当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低．更严重一点会导致泵无法吸进液体。处理方法：打开Purge阀．用3～5ml／min的流速冲洗．如果不行．则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出
2．2 漂移问题
主要包括基线漂移和保留时间漂移
2．2．1 基线漂移
一般说来．机器刚启动时．基线容易漂移．大概要30min的平衡时间， 如果用了缓冲溶液或缓冲盐，还有就是在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果在实验过程中发现基线漂移，则要考虑下面的原因(见表1)。
表1 基线漂移的原因及解决方法
控制好柱子和流动项的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱
流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池（最好断开柱子），如需要，可用1mol/l的硝酸（不要用盐酸）冲洗
紫外灯能量不足
更换新的紫外灯
流动相污染、变质或有低品质溶剂配成
检查流动相的组成，使用高品质的化学及HPLC级的溶剂
样品中有强保留的物质（高K值）以馒头 峰样被洗脱，从而表现出一个逐步升高的基线
使用保护柱，如有必要，在进样之前；在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子
检测器没有设定在最大吸收波长处
将波长调整至最大吸收波长
流动相的PH值没有调节好
加适量的酸或碱调至最佳PH值
2．2．2 保留时间漂移
保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种东西．两次的保留时间相差不要超过15s，超过了30s可看做保留时间漂移，就无法进行定性，要考
虑以下原因(见表2)。
2-3 峰形异常问题
表2 保留时间漂移的原因及解决方法
调好柱温．检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱
流动相比例变化
检查四元泵的比例阀是否有故障
色谱柱没有平衡
在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
重新设定流速
泵中有气泡
从泵中除去气泡
峰形问题是液相的主要问题．在做液相过程中，我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰形，对于各种各样的异常峰，要区别对待，从主要问题出发，逐一加以解决(见表3)。
表3 峰形异常情况的分析及部分解决方法
问题分析及部分解决方法
色谱图中未出峰
系统未进样或样品分解，泵未输液或流动向不正确。检测器设置不止确。针对以上情况成因作相应调整即可
一个峰或几个峰是负峰
流动相吸收本底值高，进样过程中进入空气，样品组分的吸收低于流动相
所又峰均为负峰
信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒，光学装置尚未达到平衡
所又峰均为宽峰
系统未达到平衡，溶解样品的溶剂极性比流动相差很多，色谱主尺寸及类型选择不正确，色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响
所出峰比预想的小
样品粘度过大，进样故障或进样体积误差；检测器设置不正确；定量环体积不正确；检测池污染：检测器灯出现问题
出现双峰或肩峰
进样量过大，样品浓度过高，色谱柱或保护柱柱头堵塞，色谱柱或保护柱污染或失效，柱塌陷或形成短通道
进样量大或样品浓度高：溶解样品的溶剂较流动相极性强；保护柱或色谱柱污染或失效
柱超载，降低样品量，怎加柱直径采用较高容量的固定相；峰干扰，对样品进行清洁过滤，调整流动相：硅羟基作用，加入 乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值：柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢；加在线过滤器，对样品进行过滤；使体积或柱外体积过大．将连接点降至最低：尽可能使用内径较细的连接管；柱效下降，更换柱子；采用保拖尾峰护柱．对柱子进行再生
出现平头峰
检测器设置不正确：进样体积太大或样品浓度太高
西稃丙有残余．在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统；样品中存在未知物，改进样品的预处理：流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤：尽可能使用HPLC级；流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除
以上只是对常见的问题进行了分析．当然在实际应用中还会遇到更多的问题，在排除故障时要遵守以下原则：一次只改变一个因素，确定假定因素与问题之间的联系：如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位，避免浪费；养成良好的记录习惯．这是成功进行故障排除的关键。总之．在使用高效仪时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养。
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主题：【已应助】梯度误差检测
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发表于： 10:57:03
我这有台Agilent1100的，在做梯度实验时，保留时间相差很大，我想做一个梯度误差检测，请教下大神，我该怎么设置方法，或者说是具体操作步骤，“JJG 705-2002”上的看的不是很明白。如果是比例阀有问题，该如何清洗尝试挽救，谢谢
最佳答案：回复于
设置A泵的流动相为100%的纯水，B泵的流动相为0.1%的丙酮水溶液，然后用梯度模式，总流量设1mL，在混合器后要接背压阀。先A为100%，再依次按20%上升B，每个梯度走30min。
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可以按照新的检定规程去做，02版的检定规程计算的过程有点问题
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原文由 飘殇(zx) 发表:设置A泵的流动相为100%的纯水，B泵的流动相为0.1%的丙酮水溶液，然后用梯度模式，总流量设1mL，在混合器后要接背压阀。先A为100%，再依次按20%上升B，每个梯度走30min。 每个梯度走30min是不是有点长，时间长短有无影响
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原文由 一片枫叶(v2960432) 发表:参考一下这个帖子或许有帮助：主题：【第六届原创】(十月）液相色谱仪检定规程中梯度误差计算公式的探讨&
& 链接： 有一篇文章也是刘老师写的，可以下载一下，是关于02版检定规程中梯度误差计算的，里面讲解的也很详细
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原文由 飘殇(zx) 发表: 应该没什么影响吧，要看梯度滞留时间了，个人感觉走的时候长点的话信号线平了更好取值。 走长了基线太长，看两端信号值反而麻烦