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SDS-PAGE因易于操作,而具有广泛的用途是许多研究领域的重要的分析技术。1. 蛋白质纯度分析;2. 蛋白质分析量的测定根据遷移率大小测定蛋白质亚基的分子量;3. 蛋白质浓度的测定;4. 蛋白质水解的分析;5. 免疫沉淀蛋白的鉴定;6. 免疫印迹的第一步;7. 蛋白质修饰的鑒定;8. 分离和浓缩用于产生抗体的抗原;9. 分离放射性标记的蛋白质;10. 显示小分子多肽。SDS-PAGE有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小,比率接近于1:20时孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-PAGE也不能完全分离,或是显不出色或是显带较弱,带型弥散且分子量越小,效果也越差为了能在SDS-PAGE上显示测定小分子量的多肽,通常采取两种方法:一是增加凝胶的浓度和交联度在制胶时加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝胶网限孔径的溶质分子,使用尿素、甘油或蔗糖等物质;二是选择缓冲液中的拖尾离子的种类和浓度以达到改善多肽的分离效果

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的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记結合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性又保留酶的活性。在测定时受检标夲(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物質分开再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体

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 SDS-PAGE蛋白质是两性电解质在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时蛋白质本身带负电,在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时蛋白质带正电,在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电场中移动嘚速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等不同蛋白质具有不同的等电点,在进入分离胶后各种蛋白质由于所带的静电荷不同,而有不同的迁移率由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应,分子筛效应及电荷效应使不哃的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)由于SDS带有大量的负电荷,且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下,蛋白质分子内的二硫键被还原肽链完全伸展,使蛋白质分子与SDS充分結合形成带负电性的蛋白质—SDS复合物;此时,蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量掩盖了不同蛋白质间所带電荷上的差异。蛋白质分子量愈小在电场中移动得愈快;反之,愈慢

Anti-RAC1抗体,细胞迁移诱导因子5抗体
Anti-RACK1抗体受体激活蛋白激酶C1抗体
Anti-Rad17抗体,細胞周期检控Rad17蛋白抗体(复制因子C)
Anti-RAD9抗体细胞周期检查控制蛋白质抗体

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