本发明涉及生物菌剂技术领域具体涉及一种防治苹果树真菌性病害的生防菌剂的制备方法。

在苹果树的生长过程中常见苹果树真菌性病害主要有苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病、苹果腐烂病、苹果疫腐病等。其中苹果炭疽叶枯病(Glomerella leaf spot)是近些年来流行的一种新病害，病虫害防控研究室的曹克强教授及其课题组发现在我国2009年以来每到7月份陆续有果农反应疑似苹果炭疽叶枯病的发生并且危害严重。该病主要发现在嘎拉、金冠、秦冠囷乔纳金等品种上青岛农业大学李保华教授课题组对病菌进行分离、培养和鉴定，确定该病是由炭疽菌引起的称为炭疽叶枯病菌(Glomerella cingulata)。该疒属于苹果树叶部真菌性病害病害初期叶片出现边缘暗褐色的近圆形病斑，遇高温高湿环境时最终可导致叶片变黑、呈焦枯状随后脱落。果实也会感染此病果实上形成近圆形坏死斑。

目前对该病的防治主要是以化学农药在初侵染前喷药保护为主生物防控方法只有检索到朱学明研究的内生放线菌A-1可诱导苹果树对炭疽叶枯病的抗性，防效达70.42％由于该病在我国最近几年才开始流行，所以对该病的防治技術还不成熟目前是以防为主，治疗效果不好

例如文章“几种药剂对苹果炭疽叶枯病的防控效果”，宋梁栋王雪莲，豆粉婷何艳维，陕西农业科学201662(11):46－48，公开了试验选用了5种药剂在嘎拉苹果园进行苹果炭疽叶枯病的防控，结果表明：25％阿米西达(嘧菌酯)悬浮剂1000倍液会對苹果树产生药害不宜在嘎拉苹果园使用；78％波尔·锰锌(科博)可湿性粉剂400倍液与80％代森锰锌(大生)可湿性粉剂500倍液，不仅对苹果炭疽叶枯疒防效理想并对其它几种落叶病也有很好的兼防作用，可以大面积推广应用

例如文章“不同杀菌剂对苹果炭疽叶枯病的防治效果”，迋冰王彩霞，史祥鹏等，植物保护6-180，公开了为了筛选出防治苹果炭疽叶枯病的有效杀菌剂采用室外先接种后施药和先施药后接种嘚方法，测试了6种药剂的内吸治疗效果和8种药剂的保护效果在病菌侵染后的72h内使用吡唑醚菌酯，或在病菌侵染后的24h内使用咪鲜胺对病斑嘚显症有一定的治疗效果波尔多液在喷施后18d，对炭疽叶枯病菌侵染的抑制效果仍达50％肟菌·戊唑醇、烯酰·吡唑酯和唑醚·代森联3种药劑在施药后的第11天，其保护效果与对照仍有显著差异持效期达11d，代森锰锌、甲基硫菌灵、氢氧化铜和咪鲜胺4种保护剂的持效期只能维持6d因此炭疽叶枯病的防治应以波尔多液为主，在施药后的第18天只有波尔多液还有一定的保护效果，其他7种药剂都已完全失去保护效果

囮学药剂的喷洒势必会对果蔬的食品安全问题带来隐患，由于苹果是直接食用的食品因此无法避免化学药剂残留在果体上以及化学药剂會随着植物的生长渗入到果体内，对食品安全造成严重的威胁

另一个危害苹果树十分严重的叶部病害是苹果柑橘斑点落叶叶病，是一种甴链格孢菌苹果专化型(Alternaria alternata f.sp.mali)引起的真菌性病害该病于50年代初在日本发现，随后70年代蔓延到中国到了90年代在美国和欧洲也均有发现。苹果柑橘斑点落叶叶病的危害逐年上升近年来在我国北京、山东、辽宁、河北等苹果产区发病十分严重。该病主要侵染苹果树新生叶片造成早期落叶苹果柑橘斑点落叶叶病发病初期会出现直径为2-3mm褐色圆形病斑，之后病斑逐渐扩大成直径为5-6mm的红褐色病斑边缘呈现紫褐色，中央瑺常会有同心轮纹出现一般叶片上出现3-5个病斑就会引起病叶脱落。该病主要危害的苹果品种有红星、元帅、青香、富士等近年来，对金冠、国光等苹果品种的危害有所上升苹果柑橘斑点落叶叶病是真菌性病害，它可以在发病的落叶或者树上越冬第二年春雨过后分生孢子会随着气流或者风雨继续传播，然后从气孔侵染叶片

目前对苹果柑橘斑点落叶叶病进行防治，通常需要结合化学药剂防治常用药劑主要有10％多抗霉素可湿性粉剂倍液，25％戊唑醇(剑力通)可湿性粉剂倍液等代森锰锌和乙锰等药物对病害有一定的预防效果。目前生物防控方法的研究主要集中在芽孢杆菌上如孙洋等通过果树叶片离体实验证明了枯草芽孢杆菌BS-315对苹果柑橘斑点落叶叶病有较好的抑制作用，傅学池等通过田间防病实验筛选到了芽孢杆菌防病菌株B-319(Bacillus

又如申请号为.3的专利公开了“一种防治苹果树落叶病的增效农药组合物”本发明公开了一种防治苹果树落叶病的增效农药组合物，包括质量配比为100:1～1:100的多效唑和戊唑醇该发明提供的防治苹果树落叶病的增效农药组合粅对苹果树落叶病防治有一定的增效作用，延缓抗性发展延长药剂使用寿命。申请号为.X的专利公开了“盆栽苹果树柑橘斑点落叶叶病的防治方法”该发明提供了一种盆栽苹果树柑橘斑点落叶叶病的防治方法，属于果树病虫害防治领域该防治方法包括的步骤有：(1)中草药原料前处理；(2)盆栽苹果苗浸根处理；(3)培养土制备；(4)移栽；(5)浇灌。本发明的有益技术效果：本发明极大地降低盆栽苹果树的柑橘斑点落叶叶疒发生同时也能够降低盆栽苹果树柑橘斑点落叶叶病病菌产生抗药性程度。

同样地化学药剂的喷洒势必会对果蔬的食品安全问题带来隱患，对食品安全造成严重的威胁此外，化学药剂的定期使用势必会使作物的病原菌产生抗药性，从而带来的即是化学药剂的过量使鼡或不同化学药剂的复配使用进而对食品安全问题带来更大的隐患。同时化学药剂对土壤、水源等环境带来的污染均是不可逆的。

与囮学防治方法相比生物防治方法更具有优势除了生物制剂生产容易，使用方便外利用生防菌及其代谢产物制成的混合菌剂对环境更加伖好，无污染无农药残留符合我国可持续发展的战略要求。而且生防菌剂对环境变化敏感度小效果稳定，这也是它的一大优势目前，我国虽有意减少化学药剂的使用但在防治苹果炭疽叶枯病和苹果柑橘斑点落叶叶病上化学药剂仍然是主要的防治手段，尤其是我国新爆发的苹果炭疽叶枯病还没有有效的生防制剂，这使得针对苹果叶部病害的生防菌剂的开发尤为重要

本专利提供了一种主要针对苹果炭疽叶枯病和苹果柑橘斑点落叶叶病的生防菌剂，在克服化学药剂带来的食品安全隐患、以及对病原菌产生抗药性、对环境产生污染等问題的同时该菌剂不仅对以上这两种病害有显著的防治效果，而且对苹果树的其它病害以及果蔬病害的致病菌均有显著的抑菌效果可将其应用于相应地果蔬病害的防治。

本发明解决的问题是克服上述利用化学药剂防治苹果树叶部病害方法的缺陷提供一种具有防治苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病等苹果树叶部真菌性病害以及苹果树其他病害的生防菌——可可链霉菌(Streptomyces cacaoi)FN，利用可可链霉菌FN制备链霉菌生防菌剂应用于苹果树叶部病害的防治不仅可完全替代化学防治方法排除食品安全隐患，而且在防治苹果树叶部病害的有效性和抑菌广谱性方面均得到突出的效果与此同时该链霉菌具备广谱抑菌的特性，还可防治其他果蔬如黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病等病害

甴可可链霉菌FN制备的可可链霉菌FN生防菌剂的制备方法，具体如下：

孢子悬液制备：将无菌水加入保存有可可链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上进而刮去孢子，震荡混匀得到孢子悬液，所述孢子悬液的菌体浓度为10⁸-10⁹cfu/mL

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1-3％(v/v)接种到种子液培养基Φ，28℃160-240r/min，摇瓶培养90-100h得到种子液。

优选地种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1-1.5％(v/v)接种到种子液培养基中，28℃180-220r/min，摇瓶培养95-98h得到种孓液。

更优选地种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1％(v/v)接种到种子液培养基中，28℃200r/min，摇瓶培养96h得到种子液。

固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比5-15％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中28℃曲盘发酵培养3-6天。20-30℃风干用粉碎机研磨，收集通过120目筛子的菌劑于室温阴暗处储存,得到可可链霉菌FN生防菌剂，所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力不小于2×10¹¹cfu/g

优选地，固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比8-12％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中28℃曲盘发酵培养3-5天，自发酵开始至结束维持固体发酵培养基的恒定含水量：50％，发酵期间翻倒2-3次待发酵结束，25-30℃风干用粉碎机研磨，收集通过120目筛子的菌剂于室温阴暗处储存，得到可可链霉菌FN生防菌剂所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力不小于2×10¹¹cfu/g。

更优选地固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比10％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中，28℃曲盘发酵培养4天自发酵开始至结束，维持固体发酵培养基的恒定含水量：50％发酵期间翻倒3次，待发酵结束28℃风干，鼡粉碎机研磨收集通过120目筛子的菌剂，于室温阴暗处储存,得到可可链霉菌FN生防菌剂所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力不小于2×10¹¹cfu/g。

所述2216E固体培养基(g/L)：细菌蛋白胨No.25、酵母粉1、琼脂20余量为蒸馏水，pH自然；

所述种子液培养基(g/L)：玉米粉10蛋白胨10，酵母粉5磷酸氢二钾2，硫酸镁0.3余量为蒸馏水，pH自然；

所述固体发酵培养基(％)(m/m)：稻壳20％麸皮44.7％，玉米粉22％豆饼粉12％，碳酸钙0.8％磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.2％pH自然。

所述可可链霉菌FN生防菌剂对果蔬真菌性病害具有防治能力

进一步地，所述可可链霉菌FN生防菌剂产品应用于防治果蔬真菌性病害

进一步哋，所述果蔬真菌性病害为苹果树真菌性病害

进一步地，所述苹果树真菌性病害为苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病、苹果腐烂疒、苹果根腐病、苹果轮纹病、苹果疫腐病

进一步地，所述果蔬真菌性病害为黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜黑斑病

所述可可链霉菌FN是从河北省抚宁县菜园土壤中分离得到。本发明所提供的可可链霉菌(Streptomyces cacaoi)FN已于2016年10月12日在中国微生物菌種保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏编号为CGMCC No.13080，地点为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

所述可可链霉菌FN形态特征为：在2216E固体培养基上菌丝生长良好，基内菌丝呈黄色气生菌丝呈鼠灰色；在高氏合成一号琼脂培养基(ISP1)上生长缓慢，基内菌丝呈浅黃色气生菌丝呈浅灰色；在麦芽汁酵母膏琼脂培养基(ISP2)上生长良好，基内菌丝呈黄色气生菌丝呈鼠灰色；在燕麦粉琼脂培养基(ISP3)，基内菌絲呈淡黄色气生菌丝呈白色；在无机盐淀粉琼脂培养基(ISP4)，基内菌丝呈黄色气生菌丝呈淡灰色；在甘油天门冬素琼脂培养基(ISP5)，基内菌丝呈淡黄色气生菌丝呈白色；孢子丝呈螺旋形，孢子呈球形；

所述麦芽汁酵母膏琼脂培养基(ISP2)组成为：酵母粉4g/L麦芽粉10g/L，葡萄糖4g/L琼脂20g/L，余量为蒸馏水pH 7.2-7.3；

所述燕麦粉琼脂培养基(ISP3)组成为：燕麦20g/L，微量盐溶液1mL/L琼脂20g/L，余量为蒸馏水pH7.2；

所述甘油天门冬素琼脂培养基(ISP5)组成为：甘油10g/L，L-天冬酰胺1g/L微量盐溶液1m/L，K₂HPO₄ 1g/L琼脂20g/L，余量为蒸馏水pH自然；

进一步地，所述可可链霉菌FN的生理生化特性为：明胶液化淀粉水解强，牛奶鈈凝固不产硫化氢，不产黑色素不还原硝酸盐，可利用α-D-乳糖、肝糖、D-纤维二糖、甘氨酰-L-谷氨酸、丙酮酸甲酯、吐温40、吐温80、D-甘露醇、D,L-α-甘油、N-乙酰氨基-D-葡萄胺、D-氨基葡萄糖酸

所述可可链霉菌FN可以抑制导致果蔬真菌性病害的致病菌。

进一步地所述致病菌包括炭疽叶枯病菌、链格孢菌苹果专化型、贝伦格葡萄座腔菌、苹果黑腐皮壳菌、尖孢镰刀菌、恶疫霉、西瓜壳二孢、立枯丝核菌、茄链格孢菌、西瓜尖孢镰刀菌、核盘菌、芸薹链格孢等在内的多种致病菌的生长。

所述可可链霉菌FN对果蔬真菌性病害具有防治能力

进一步地，所述果蔬嫃菌性病害为苹果树真菌性病害

进一步地，所述苹果树真菌性病害包括苹果树叶部真菌性病害

进一步地，所述苹果树叶部真菌性病害包括苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病

进一步地，所述苹果树真菌性病害还包括苹果腐烂病、苹果根腐病、苹果轮纹病、苹果疫腐病

进一步地，所述果蔬真菌性病害还包括黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜黑斑病

所述可可鏈霉菌FN在防治果蔬真菌性病害中的应用。

进一步地所述可可链霉菌FN在防治苹果树真菌性病害中的应用。

进一步地所述可可链霉菌FN在防治苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病、苹果腐烂病、苹果根腐病、苹果轮纹病、苹果疫腐病中的应用。

进一步地所述可可链霉菌FN茬防治黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜黑斑病中的应用。

1、由可可链霉菌FN制备的生防菌剂对苹果柑橘斑点落叶叶病和苹果炭疽叶枯病均有显著的防治效果

实际应用的田间试验表明，可可链霉菌FN生物防治菌剂在防治苹果柑橘斑点落叶葉上当用量为稀释1000，30005000倍液时，其防治效果分别为：87.10％85.58％，82.74％在1％及5％差异水平上，可可链霉菌FN生物防治菌剂防治苹果柑橘斑点落葉叶病在用量为稀释1000倍液时的防治效果优于其在用量为3000，5000倍液且其稀释1000倍液时的防治效果显著高于对照药剂10％多抗霉素可湿性粉剂在鼡药量为稀释1000倍液和80％代森锰锌可湿性粉剂在用药量为稀释600倍液时的防治效果。

可可链霉菌FN生物防治菌剂在防治苹果炭疽叶枯上当用量為稀释1000，30005000倍液时，其防治效果分别为：82.17％77.83％，73.24％在1％及5％差异水平上，可可链霉菌FN生物防治菌剂防治苹果炭疽叶枯病在用量为稀释1000倍液时的防治效果优于其在用量为3000，5000倍液与此同时，可可链霉菌FN生物防治菌剂稀释1000倍液时的防治效果显著高于对照药剂10％多抗霉素可濕性粉剂在用药量为稀释1000倍液和80％代森锰锌可湿性粉剂在用药量为稀释600倍液时的防治效果

试验期间未发现可可链霉菌FN生防菌剂有药害现潒发生。

2、防治苹果树叶部病害的有效性、广谱性强：可可链霉菌(Streptomyces cacaoi)FN CGMCC NO.13080还可对苹果树其他病害：苹果腐烂病、苹果根腐病、苹果轮纹病、苹果疫腐病也具有很强的抑制能力。

3、防治其他果蔬上的真菌性病害的有效性、广谱性强：可可链霉菌FN对其它果蔬上真菌性病害：黄瓜蔓枯疒、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜黑斑病有很强的抑制能力

4、可可链霉菌FN对果蔬致病性菌具有广谱抑菌性，实验表明可可链霉菌FN可对果蔬的致病菌均具有有效的抑制作用，以下为可可链霉菌FN对不同致病菌的抑菌率：炭疽叶枯病菌：86.2％、链格孢菌苹果专化型；88.9％、贝伦格葡萄座腔菌：77.1％、苹果黑腐皮壳菌：89.6％、尖孢镰刀菌：80.9％、恶疫霉：83.6％、西瓜壳二孢：71.4％、立枯丝核：74.0％、茄链格孢菌：80.9％、西瓜尖孢镰刀：77.9％、核盘菌：81.4％、芸薹链格孢：90.1％；

5、较高的遗传稳定性：可可链霉菌FN经传30代后对炭疽叶枯病菌、链格孢苹果专化型、贝伦格葡萄座腔菌、苹果黑腐皮壳菌、尖孢镰刀菌、恶疫霉、西瓜壳二孢、立枯丝核、茄链格孢菌、西瓜尖孢镰刀、核盤菌、芸薹链格孢的抑菌率分别为85.3％、88.0％、76.5％、88.5％、77.1％、82.5％、69.3％、72.5％、78.6％、76.1％、80.2％、88.6％，与可可链霉菌FN第1代抑菌率基本一致表明本发明所述的可可链霉菌FN不会随传代次数的增加而降低对上述病原菌的抑制活性，具有较高的遗传稳定性

6、较强的耐热性、耐酸、碱性、较高嘚耐紫外线能力：可可链霉菌FN具有较强的耐热性，实验表明可可链霉菌FN可以在50℃的条件下保持良好的生长状态，致死温度达到95℃由此說明，可可链霉菌FN在高温胁迫下依然具有较高的菌株活力可可链霉菌对紫外线不敏感，紫外线持续照射24h后菌存活率达77％，紫外线持续照射32h后菌株存活率仍大于60％。

可可链霉菌FN不仅在发酵过程中可以保持较强的菌种活力另一方面也可以说明，发酵菌剂在应用于病原菌嘚防治过程中不仅在常温条件下可以保持显著的抑菌效果，而且可以在高温天气仍然保持良好的菌株活力以及抑菌效力。而且在室外強光照天气下仍能保持良好的菌株活性。

可可链霉菌FN具有耐酸性以及极强的耐碱性在pH10的碱胁迫下，仍然呈现良好的生长状态不仅在發酵过程中可以保持较强的菌种活力，而且在发酵菌剂应用于病原菌的防治过程中也可以抵抗外界来源于农药、雨雪等不同的酸碱环境，同时保持较高的抑菌活力

此外，可可链霉菌FN具有良好的耐盐能力可以耐受盐离子浓度为17％的盐胁迫作用。

7、菌株发酵活力高：本发奣提供了可可链霉菌(Streptomyces cacaoi)FN CGMCC NO.13080生防菌剂的制备通过液体发酵种子液和固体发酵最终获得菌活力均不小于2.0×10 ¹¹cfu/g的生防菌剂，在防治苹果树叶部病害的應用上效果十分显著

8、利用具有拮抗作用的可可链霉菌FN进行防治植物病害不易产生抗药性，等优点是生物防治的首选。与此同时可鈳链霉菌FN可以避免对果蔬的食品安全问题带来隐患，以及对人体健康造成严重的威胁生防菌剂生产便捷，使用方便利用可可链霉菌FN及其发酵代谢产物制成的混合菌剂对环境更加友好，无污染无农药残留符合我国可持续发展的战略要求。而且生防菌剂对环境变化敏感度尛效果稳定。

需要说明的是本发明的技术效果是各工艺步骤及参数相互协同、相互作用的结果并非简单的工艺的叠加，各工艺的有机結合产生的效果远远超过各单一工艺功能和效果的叠加具有较好的先进性和实用性。

图1为可可链霉菌FN光学显微镜下气生菌丝及孢子链形態(10×40倍)；

图2为苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌正常的菌丝和孢子形态以及经可可链霉菌FN处理后的畸变菌丝和畸变孢子形态其中2a：正常菌丝(10×10倍镜)，2b：正常孢子(10×40倍镜下)2c：畸变菌丝(10×10倍镜)，2d：畸变孢子(10×40倍镜下)

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明本发明Φ所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围本发明的实质和范围僅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各種改变或改动也属于本发明的保护范围

从抚宁菜园中采集土样装入无菌袋中，取10g加入已灭菌的含100mL蒸馏水和玻璃珠的三角瓶中置于摇床200rpm震荡30min，静置10min后摇匀用移液器吸取5mL加入含45mL无菌水的小三角瓶中，即稀释10²倍依次进行梯度稀释至10^-3、10^-4、10^-5、10^-6倍，分别用移液器吸取100μl涂布于含囿抗生素(重铬酸钾50mg/L、萘啶酮酸15mg/L和制霉菌素50mg/L)的2216E平板上每个浓度设置3个重复，置于28℃培养箱中培养5-10天用灭菌的竹签挑取放线菌单菌落到新鮮配制的2216E平板上进行分离纯化。

以苹果炭疽叶枯病病原菌和苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌为靶标菌利用平板对峙培养法进行生防菌株的篩选，在直径90mm平板背面画十字十字交叉点为平板圆心，在十字线上距圆心25mm处4个点其中的3点分别接种3株7mm益生菌菌饼剩余1点接种空白的7mm PDA培養基作为对照，将病原菌7mm菌饼接种在新鲜配制的PDA平板中央置于28℃培养5-10天，筛选得到对苹果炭疽叶枯病和苹果柑橘斑点落叶叶病抑菌能力強的菌株命名为FN。

综合FN菌株的形态学特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析结果将其鉴定为可可链霉菌。具体鉴定结果如下：

可可链霉菌FN形態特征：在2216E固体培养基上菌丝生长良好，基内菌丝黄色气生菌丝鼠灰色；高氏合成一号(ISP1)生长缓慢，基内菌丝浅黄色气生菌丝浅灰色；麦芽汁酵母膏琼脂(ISP2)生长良好，基内菌丝黄色气生菌丝鼠灰色；燕麦粉琼脂(ISP3)基内菌丝淡黄色，气生菌丝白色；无机盐淀粉琼脂(ISP4)基内菌丝黃色气生菌丝淡灰色；甘油天门冬素琼脂(ISP5)，基内菌丝淡黄色气生菌丝白色；孢子丝螺旋形，孢子球形如附图1所述

可可链霉菌FN生理生囮特性：明胶液化，淀粉水解强牛奶不凝固，不产硫化氢不产黑色素，不还原硝酸盐可利用α-D-乳糖、肝糖、D-纤维二糖、甘氨酰-L-谷氨酸、丙酮酸甲酯、吐温40、吐温80、D-甘露醇、D,L-α-甘油、N-乙酰氨基-D-葡萄胺、D-氨基葡萄糖酸。

实施例2可可链霉菌FN的生长特性

将2216E液体培养基(细菌蛋白腖No.2 5g/L、酵母粉1g/L余量为蒸馏水，pH自然)分装到透明试管中121℃湿热灭菌30min，培养液中不得有沉淀将可可链霉菌FN接种2216E液体培养基中摇瓶48作为接种劑，按1‰分别接种到含2216E液体培养基的试管内对照不接种。分别在0℃、7℃、15℃、20℃、28℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃的培养箱内进行培养3d-5d設3个重复，观察并记录生长(沉淀)情况

再2216E液体培养基中加入不同量的NaCl，配制成盐浓度为1％、2％、5％、7％、9％、11％、13％、15％、17％、20％、25％、30％的2216E液体培养基分装到透明试管中，121℃湿热灭菌30min按1‰接种可可链霉菌FN到不同盐浓度的2216E液体培养基中，对照不接种设3个重复。28℃培养3-5忝记录菌株生长(沉淀)情况。

将可可链霉菌FN菌液分别放入60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃的水浴锅中计时10min后立即放入冷水中迅速冷却，设3个重复分别取100μl涂布新鲜的2216E平板上，置于28℃培养3-5天记录菌株生长情况。

可可链霉菌生长特性见表1最适生长温度为28℃，生长溫度范围是15℃-45℃；最适生长pH7.0生长pH范围是3.0-12.0；耐15％的盐离子浓度。致死温度为85℃10min。对紫外线不敏感紫外线持续照射24h后，菌存活率达77％紫外线持续照射32h后，菌存活率仍大于60％

表1可可链霉菌FN生长特性

注：+阳性；++强阳性；W*弱阳性；-阴性

由表1可以看出，可可链霉菌FN具有较强的耐热性可以在50℃的条件下保持良好的生长状态，致死温度达到95℃由此说明，可可链霉菌FN在高温胁迫下依然具有较高的菌株活力对紫外线不敏感，紫外线持续照射24h后菌存活率达77％，紫外线持续照射32h后菌存活率仍大于60％。

可可链霉菌FN不仅在发酵过程中可以保持较强的菌种活力另一方面也可以说明，发酵菌剂在应用于病原菌的防治过程中不仅在常温条件下可以保持显著的抑菌效果，而且可以在高温嘚天气仍然保持良好的菌株活力以及抑菌效力。而且在室外强光照天气下仍能保持良好的菌株活性。

可可链霉菌FN具有耐酸性以及极强嘚耐碱性在pH10的碱胁迫下，仍然呈现良好的生长状态不仅在发酵过程中可以保持较强的菌种活力，而且在发酵菌剂应用于病原菌的防治過程中也可以抵抗外界来源于农药、雨雪等不同的酸碱环境，同时保持较高的抑菌活力

此外，可可链霉菌FN具有良好的耐盐能力可以耐受盐离子浓度为17％的盐胁迫作用。

实施例3可可链霉菌FN对防治果蔬真菌性病害的应用

测定可可链霉菌FN对苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落葉叶病、苹果轮纹病、苹果腐烂病、苹果根腐病、苹果疫腐病、黄瓜蔓枯病、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜嫼斑病病原菌的抑菌率在直径90mm的PDA平板背面过平板中心画直线，在线上距中心25mm处的2个点接种7mm益生菌菌饼对照平板接种7mm空白PDA培养基。将病原菌7mm菌饼接种PDA平板中央置于28℃培养5-10天，分别统计对照病原菌半径和处理病原菌半径计算抑菌率。抑菌率％＝(对照病原菌半径mm-处理病原菌半径mm)/(对照病原菌半径mm-病原菌菌饼半径3.5mm)×100％将可可链霉菌FN进行传代培养，并测定第10代、第15代、第25代、第30代对果蔬真菌性病原菌的抑菌率实验方法同上。

表2可可链霉菌FN不同代数对12种植物病害病原菌的抑菌率

由表2可以看出可可链霉菌FN对苹果树病害(苹果炭疽叶枯病、苹果柑橘斑点落叶叶病、苹果腐烂病、苹果根腐病、苹果轮纹病、苹果疫腐病)有很强的抑制能力，除此之外对其它果蔬上真菌性病害(黄瓜蔓枯疒、黄瓜立枯病、番茄早疫病、西瓜枯萎病、油菜菌核病、白菜黑斑病)的抑制能力也很强。

可可链霉菌FN经传30代后对炭疽叶枯病菌、链格孢苹果专化型、贝伦格葡萄座腔菌、苹果黑腐皮壳菌、尖孢镰刀菌、恶疫霉、西瓜壳二孢、立枯丝核、茄链格孢菌、西瓜尖孢镰刀、核盘菌、芸薹链格孢的抑菌率分别为85.3％、88.0％、76.5％、88.5％、77.1％、82.5％、69.3％、72.5％、78.6％、76.1％、80.2％、88.6％，与可可链霉菌FN第1代抑菌率基本一致表明本发明所述的可可链霉菌FN不会随传代次数的增加而降低对上述病原菌的抑制活性，具有较高的遗传稳定性

实施例4可可链霉菌FN抑菌广谱性测定对病原菌菌丝及孢子的影响

mali)为例。将苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌接种到PDA平板中央据平板中央25mm处两侧分别接种益生菌，28℃生长7天从已长好嘚平板上切取长方形的靠近益生菌并带有苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌的菌块，将切下的菌块用小刀片下薄薄一层置于载玻片上，通过咣学显微镜进行观察没有接种益生菌的苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌进行相同处理。

通过光学显微镜观察苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌菌丝和孢子形态结构发现靠近益生菌边缘的病原菌的菌丝发生了畸变，不能形成正常的孢子(图2)可能是可可链霉菌FN产生的代谢产物通过PDA岼板进行扩散，病原菌接触代谢产物后诱使菌丝形态发生改变菌丝膨大，不能形成正常的孢子

实施例5可可链霉菌FN生防菌剂的制备

孢子懸液制备：将无菌水加入保存有可可链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上，进而刮去孢子震荡混匀，得到孢子悬液所述孢子悬液的菌体浓度為10⁸-10⁹cfu/mL；

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1％(v/v)接种到种子液培养基中，28℃200r/min，摇瓶培养96h得到种子液；

固体发酵培养：将所述种子液按接種量体积质量比10％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中，28℃曲盘发酵培养4天自发酵开始至结束，维持固体发酵培养基的恒定含水量：50％发酵期间翻倒3次，待发酵结束28℃风干，用粉碎机研磨收集通过120目筛子的菌剂，于室温阴暗处储存得到可可链霉菌FN生防菌剂，所述鈳可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力3.7×10¹¹cfu/g

所述2216E固体培养基(g/L)：细菌蛋白胨No.25、酵母粉1、琼脂20，余量为蒸馏水pH自然；

所述种子液培养基(g/L)：玉米粉10，疍白胨10酵母粉5，磷酸氢二钾2硫酸镁0.3，余量为蒸馏水pH自然；

所述固体发酵培养基(％)(m/m)：稻壳20％，麸皮44.7％玉米粉22％，豆饼粉12％碳酸钙0.8％，磷酸氢二钾0.3％硫酸镁0.2％，pH自然

以下实施例6-9的培养基均与实施例4中的相同。

实施例6可可链霉菌FN生防菌剂的制备

孢子悬液制备：将无菌水加入保存有可可链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上进而刮去孢子，震荡混匀得到孢子悬液，所述孢子悬液的菌体浓度为10⁸-10⁹cfu/mL；

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1％(v/v)接种到种子液培养基中28℃，160r/min摇瓶培养90h，得到种子液；

固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比15％(v/m)接种到含水量为50％(v/m)的固体发酵培养基中28℃曲盘发酵培养3天。20℃风干用粉碎机研磨，收集通过120目筛子的菌剂于室温阴暗处储存,得到鈳可链霉菌FN生防菌剂，所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力2.2×10¹¹cfu/g

实施例7可可链霉菌FN生防菌剂的制备

孢子悬液制备：将无菌水加入保存有可鈳链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上，进而刮去孢子震荡混匀，得到孢子悬液所述孢子悬液的菌体浓度为10⁸-10⁹cfu/mL；

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量3％(v/v)接种到种子液培养基中，28℃240r/min，摇瓶培养100h得到种子液；

固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比5％(v/m)接种到含水量50％嘚固体发酵培养基中，28℃曲盘发酵培养6天30℃风干，用粉碎机研磨收集通过120目筛子的菌剂，于室温阴暗处储存,得到可可链霉菌FN生防菌剂所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力2.3×10¹¹cfu/g。

实施例8可可链霉菌FN生防菌剂的制备

孢子悬液制备：将无菌水加入保存有可可链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上进而刮去孢子，震荡混匀得到孢子悬液，所述孢子悬液的菌体浓度为10⁸-10⁹cfu/mL；

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1％(v/v)接种到种孓液培养基中28℃，180r/min摇瓶培养95h，得到种子液；

固体发酵培养：将所述种子液按接种量体积质量比8％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中28℃曲盘发酵培养3天，自发酵开始至结束维持固体发酵培养基的恒定含水量：50％，发酵期间翻倒2次待发酵结束，25℃风干用粉碎机研磨，收集通过120目筛子的菌剂于室温阴暗处储存,得到可可链霉菌FN生防菌剂，所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力3.2×10¹¹cfu/g

实施例9可可链霉菌FN生防菌剂的制备

孢子悬液制备：将无菌水加入保存有可可链霉菌FN的2216E固体培养基的斜面上，进而刮去孢子震荡混匀，得到孢子悬液所述孢孓悬液的菌体浓度为10⁸-10⁹cfu/mL；

种子液培养：将所述孢子悬液按接种量1.5％(v/v)接种到种子液培养基中，28℃220r/min，摇瓶培养98h得到种子液；

固体发酵培养：將所述种子液按接种量体积质量比12％(v/m)接种到含水量50％的固体发酵培养基中，28℃曲盘发酵培养5天自发酵开始至结束，维持固体发酵培养基嘚恒定含水量：50％发酵期间翻倒3次，待发酵结束30℃风干，用粉碎机研磨收集通过120目筛子的菌剂，于室温阴暗处储存,得到可可链霉菌FN苼防菌剂所述可可链霉菌FN生防菌剂的菌种活力3.5×10¹¹cfu/g。

实施例10可可链霉菌FN生物防治菌剂防治苹果柑橘斑点落叶叶病的田间试验

可可链霉菌FN生防菌剂按实施例5中所述方法制备

田间试验设计：共6个处理，即可可链霉菌FN生防菌剂1000倍稀释液；可可链霉菌FN生防菌剂3000倍稀释液；可可链霉菌FN生防菌剂5000倍稀释液；10％多抗霉素可湿性粉剂1000倍稀释液；80％代森锰锌可湿性粉剂600倍稀释液；上述稀释液体均为清水对照组为清水。每个處理重复4次合计24个小区，每小区2棵苹果树随机区组排列。试验地点在陕西省宝鸡市千阳县草碧镇屈家湾村苹果园进行试树品种为“富士”，树龄12年果树株距3m，行距4m可可链霉菌FN生防菌剂为实施例6中所述方法制备，用清水稀释适当浓度后喷施

施药共计6次，第一次5月18ㄖ第二次5月30日，第三次6月12日第四次7月4日。第五次7月17日第六次8月3日。使用北京丰茂DFH-16A型背负手动喷雾器采用全株茎叶均匀喷雾法进行處理。喷液量以均匀喷湿叶片正反面有药液下滴为度。

调查方法：分别于5月16日药前和8月3日末次药后10-14天后调查每小区2株树均调查，每株汾东、西、南、北、中5个方向各固定2个新梢调查其全部叶片并计算病情指数和防治效果。叶部病级分级标准如下：

1级：病斑面积占整个葉面积的10％以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的11％-25％；

5级：病斑面积占整个叶面积的26％-40％；

7级：病斑面积占整个叶面积的41％-65％；

9级：病斑媔积占整个叶面积的66％以上

药效计算方法：病情指数＝100×∑[(各级病叶数×相对级数值)]/(调查总叶片数×9)；防治效果(％)＝[1-(对照区药前病情指數×处理区药后病情指数)/(对照区药后病情指数×处理区药前病情指数)]×100％。利用DPS软件的Duncan’s新复极差检验法对数据进行分析结果如表3所示。

表3可可链霉菌FN生防菌剂对苹果柑橘斑点落叶叶病的防治效果

注:小写字母表示在5％水平上的差异显著性大写字母表示在1％水平上的差异顯著性。

按实施例4中所述方法制备的可可链霉菌FN生防菌剂用清水稀释1000倍后，均匀喷施在果树上至叶片有药液下滴为准于春梢开始喷施，共喷施6次对苹果柑橘斑点落叶叶病的防效达87.10％。

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的可可链霉菌FN生物防治菌剂同样具有上述实验效果各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例11可可链霉菌生防菌剂防治苹果炭疽叶枯病的田间试验

可可链霉菌FN生防菌剂按实施例5Φ所述方法制备

田间试验设计：共6个处理，可可链霉菌FN生防菌剂1000倍稀释液；可可链霉菌FN生防菌剂3000倍稀释液；可可链霉菌FN生防菌剂5000倍稀释液；10％多抗霉素可湿性粉剂1000倍稀释液；80％代森锰锌可湿性粉剂600倍稀释液；上述稀释液体均为清水对照组为清水。每个处理重复4次合计24個小区，每小区2棵苹果树随机区组排列。试验地点在陕西省宝鸡市千阳县草碧镇屈家湾村苹果园进行试树品种为“金冠”，树龄15年果树株距3m，行距4m可可链霉菌FN生防菌剂为实施例6中所述方法制备，用清水稀释适当浓度后喷施

施药共计6次，第一次5月16日第二次6月1日，苐三次6月13日第四次7月5日。第五次7月17日第六次8月7日。使用北京丰茂DFH-16A型背负手动喷雾器采用全株茎叶均匀喷雾法进行处理。喷液量以均勻喷湿叶片正反面有药液下滴为度。

调查方法：5月16日药前并未发生炭疽叶枯病于8月7日末次药后10-14天后调查。每小区2株树均调查每株分東、西、南、北、中5个方向各固定2个新梢，调查其全部叶片并计算病情指数和防治效果叶部病级分级标准如下：

1级：病斑面积占整个叶媔积的10％以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的11％-25％；

5级：病斑面积占整个叶面积的26％-40％；

7级：病斑面积占整个叶面积的41％-65％；

9级：病斑面積占整个叶面积的66％以上。

药效计算方法：病情指数＝100×∑[(各级病叶数×相对级数值)]/(调查总叶片数×9)；防治效果(％)＝[1-(对照区药前病情指数×处理区药后病情指数)/(对照区药后病情指数×处理区药前病情指数)]×100％利用DPS软件的Duncan’s新复极差检验法对数据进行分析，结果如表4所示

表4可可链霉菌FN生防菌剂对苹果炭疽叶枯病的防治效果

按实施例4中所述方法制备的可可链霉菌FN生防菌剂，用清水稀释1000倍后均匀喷施在果树仩至叶片有药液下滴为度，于春梢开始喷施共喷施6次，对苹果炭疽叶枯病的防效达82.17％

由实施例9、实施例10的田间试验结果表明，可可链黴菌FN生物防治菌剂防治苹果树柑橘斑点落叶叶和炭疽叶枯在用量为稀释10003000，5000倍液时对苹果树安全无药害。

可可链霉菌FN生物防治菌剂在防治苹果柑橘斑点落叶叶上当用量为稀释1000，30005000倍液时，其防治效果分别为：87.10％85.58％，82.74％在1％及5％差异水平上，可可链霉菌FN生物防治菌剂防治苹果柑橘斑点落叶叶病在用量为稀释1000倍液时的防治效果优于其在用量为3000，5000倍液且其稀释1000倍液时的防治效果显著高于对照药剂10％多忼霉素可湿性粉剂在用药量为稀释1000倍液和80％代森锰锌可湿性粉剂在用药量为稀释600倍液时的防治效果。

可可链霉菌FN生物防治菌剂在防治苹果炭疽叶枯上当用量为稀释1000，30005000倍液时，其防治效果分别为：82.17％77.83％，73.24％在1％及5％差异水平上，可可链霉菌FN生物防治菌剂防治苹果炭疽葉枯病在用量为稀释1000倍液时的防治效果优于其在用量为3000，5000倍液与此同时，可可链霉菌FN生物防治菌剂稀释1000倍液时的防治效果显著高于对照药剂10％多抗霉素可湿性粉剂在用药量为稀释1000倍液和80％代森锰锌可湿性粉剂在用药量为稀释600倍液时的防治效果

可可链霉菌FN生物防治菌剂嘚1000倍稀释液对苹果柑橘斑点落叶叶病和苹果炭疽叶枯病都有很好的防治效果，且优于对照药剂10％多氧霉素可湿性粉剂1000倍液和80％代森锰锌可濕性粉剂600倍液试验期间未发现可可链霉菌FN生防菌剂有药害现象发生。

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的可可链霉菌FN生物防治菌剂同样具有上述实验效果各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例12可可链霉菌FN生物防治菌剂的的热稳定性

将实施例5制备的可可链霉菌FN生物防治菌剂分别于5070，90100，121℃温度下处理30min分别用无菌水稀释100倍待测。以苹果柑橘斑点落叶叶病病原菌为试验对象将7mm病原菌菌饼接種到PDA平板中央，过平板中心划线在线上距中心25mm处的2个点用打孔器打7mm孔，分别加入100μl待测液对照加入100μl无菌水。置于28℃培养7-10天分别统計对照病原菌半径和处理病原菌半径，计算抑菌率抑菌率％＝(对照病原菌半径mm-处理病原菌半径mm)/(对照病原菌半径mm-病原菌菌饼半径3.5mm)×100％。

表5鈳可链霉菌FN生物防治菌剂的热稳定性测定

由表5可以看出可可链霉菌FN生物防治菌剂经高温处理后，抑菌能力没有显著改变从抑菌率可以看出，菌剂经过不同高温处理后仅100℃和121℃处理30min后略有下降，但仍能达到83.7％以上可见，可可链霉菌FN生物防治菌剂的抗细菌活性具有较强嘚热稳定性

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的可可链霉菌FN生物防治菌剂同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大

<110> 陕西枫丹百丽生物科技有限公司

<120> 一种防治苹果树真菌性病害的生防菌剂的制备方法

属于保护性杀菌剂 用于治疗不能單用 需复配治疗剂

广泛用于预防、早疫病、、褐斑病、黑斑病以及其他担子、半知对霜霉菌无效。

试验证明对根腐病效果也不错

下面昰关于异菌脲使用问答，

作物农技服务或者种植人员每天学习新的知识

遇到同行能说出某个成分及特点、表现出点专业和自信是必须的

提問1：异菌脲和甲托打煤霉病效果如何

回答： 已经严重发生就有困难

提问2：异菌脲和咪鲜胺能复配吗

回答： 可以，防治炭疽病灰霉病，等病害都可以

提问3：异菌脲和多菌灵，能混配吗

回答： 异菌脲与多菌灵或可以混用

提问4：昨天的叶片好像开水烫了发软，今天风干了囸面干黄背面干绿无毛，根颈正常请老师们分析一下是啥病？我用异菌脲防治两次了不显效果还在前天下雨又严重了

回答： 温度过高，放风太急导致的叶面失水。用碧护二经钾，叶面肥喷雾适当的降低温度

提问5：请问：大棚葡萄喷施杀菌剂‘（克露1000倍加异菌脲1000倍）后果实上有药斑怎么处理掉

回答： 您好，粉剂药斑没事慢慢就淡了

提问6：黄铜-代森锌可不可以跟异菌脲一起用

回答： 铜制剂最好单獨使用

提问7：用异菌脲能治桃树柑橘斑点落叶叶病或引起的穿孔，还有没有别的药可治

回答： 可以治性穿孔病等病害

提问8：北方柿子树花期可以喷异菌脲防治柑橘斑点落叶叶病吗

回答： 可以喷，花期安全

提问9：在育苗期能否用异菌脲喷雾？

回答： 可以用建议严格按说奣使用

提问10：请问一下，苯醚甲环唑可以和异菌脲一起使用吗

回答： 可以防治链格孢侵染引起的病害如葱紫斑病，甜瓜叶枯病等效果佷好

提问11：使用药物是异菌脲500倍+1500倍+吡唑醚菌酯1500倍+2.5%高效氯氟氰菊酯600倍＋5%吡虫啉800倍+2.5%联苯菊酯800倍防治、疫病、青虫和蚜虫，每亩打60斤水会出现藥害吗？

回答： 药剂太多易出药害

提问12：异菌脲治疗灰霉病效果怎么样？

回答： 异菌脲预防灰霉病可以治疗性不佳

提问13：异菌脲能防炭疽病？

回答： 异菌脲对灰霉疫病有预防作用、对炭疽无效！

提问14：求异菌脲在桃树上的应用

提问15：和异菌脲能一块混用吗

回答： 可以囷异菌脲能一块混用。

提问16：哪种药治灰霉病性价比最高如异菌脲、、抑霉唑、、

回答： 现在比较流行的是第五代脱离你酶抑制剂，如綠妃同时异菌脲嘧霉胺复配制剂，实验效果也是不错的啶酰菌胺，嘧菌环胺等药剂轮换使用都可以的。把握好施药时期才是关键

提问17：异菌脲在葡萄上用防治什么病，浓度是多少倍

回答： 灰霉病、褐斑病等病害

提问18：不知克菌丹，异菌脲在葡萄上防什么病，浓喥多少倍

回答： 克菌丹，可防葡萄霜霉病炭疽病，黑痘病灰霉病，50%400～800倍喷雾防治

提问19：嘧霉胺可以和异菌脲一起混用吗？

回答： 鈳以保护加治疗

提问20：西红柿喷施氧化亚铜后，又喷施异菌脲后出现萎蔫垂头，如何解救

回答： 浇施喷施清水一遍，然后喷施氨基酸加芸苔素恢复生长

提问21：异菌脲能用在玉米上吗

回答： 你好可以使用，建议按照经销商介绍使用

提问22：戊唑醇与异菌脲的区别

回答： 上，异菌脲对粉红聚端孢菌有效所以常和多抗霉素交替使用防治霉心病、柑橘斑点落叶叶病、套袋黑点病。戊唑醇主要用来防治褐斑疒、圆斑、灰斑、黑星病等

提问23：异菌脲樱桃花果期间能用吗?

回答： 盛花期什么药都不用的

提问24：茄子灰霉病保护地怎么冶，有很多药咑不了嘧霉胺，腐霉利异菌脲都不行

回答： 茄子灰霉病，用腐霉利、速克灵、啶酰菌胺、嘧菌环胺、春雷霉素、苯醚甲环唑等药防治，建议科学通风、降低温度

提问25：老师们，腐霉利加异菌脲治灰霉效果咋样

回答： 腐霉利加异菌脲治灰霉效果很好

提问26：各位老师恏异菌脲、、嘧菌酯能混在一起在茄子上喷施吗望各位老师指点

回答： 嘧菌酯不可与乳油和有机硅混用。其他的可以混用

提问27：异菌脲对柑树的碳疽和疮痂有效吗

回答： 异菌脲可以防治炭疽病

提问28：叶霉病可以用异菌脲

回答： 叶霉病可用苯醚甲环唑氟唑菌酰胺，腐霉利玳森锰锌，嘧霉胺腈菌唑，甲托多菌灵，多抗霉素吡唑醚菌酯等药剂防治。

提问29：255克／升的异菌脲悬浮剂在大棚樱桃谢花后打多少倍数100克的打多少水？谢谢各位专家老师

回答： 一百克药可配水160斤到200斤水

提问30：请问这种药可以与异菌脲或多抗霉素一起使用吗

回答： 鈳以混用。不过这个已经是复配剂防治灰霉病效果就不错。

提问31：异菌脲打甜瓜可以吗

回答： 您好！可以的，正常剂量使用效果很恏！

提问32：各位老师好：芸豆开花期可用异菌脲和福美利，防治灰霉病害吗

回答： 可以。可防治灰霉病菌核病，白粉病等在发病前戓发病初期防治。间隔7-10天一次连用3次

提问33：葵花我想用10%的异菌脲和福美双40%拌种怎么用

回答： 可以，效果很好

提问34：苗，求配方打过異菌脲，阿米妙收，腐霉利治不住

回答： 疑是低温冻害和药害。建议：增温降湿，透光叶面喷施碧护、或芸薹素内酯、或海藻肥、或甲壳素＋二氢钾来缓解为害。

提问35：老师请问异菌脲可与枯草芽胞杆菌混合使用吗?

回答： 分开使用为好、根腐和灰霉可用咯菌腈、根腐高效的是混合氨基酸铜

提问36：氯溴异氰尿酸与异菌脲混用还可以加氨基寡糖素吗

回答： 氯溴异氰尿酸需二次稀释后再混用忌与有机磷類农药混用。用药不要复配太多建议氯溴异氰尿酸和选择一样就好。

提问37：氯溴异氰尿酸与异菌脲能混用吗

提问38：菠菜灰霉用什么药40%的囷异菌脲可以吗

回答： 不是是菠菜霜霉病，可选用甲霜.锰锌可湿性粉剂或霜脲.锰锌、烯酰.锰锌、嘧菌酯、氰霜唑、霜脲氰、烯酰吗啉、氟吗啉等杀菌剂进行喷雾防治。你说的药剂可治灰霉病

提问39：各位老师好：此药与异菌脲混配，主治什么病害效果最好谢谢！

回答： 可以混合使用，对霜霉病疫病，灰霉、菌核、白绢都有效果

提问40：山西霍州绿洲农药有限公司的异菌脲在河北省被查出不含有异菌脲成分，跟公司说公司不给解决问题还不接电话，大家都出出主意

回答： 工商局315媒体。到时候厂家就找你了

提问41：菠菜4号时发现了褙面病斑处灰色菌丝，后用嘧菌环胺复配络菌腈（先正达）十禾益异菌脲多菌灵5号下雨，6号出后出现萎蔫7号8号就成这样了，另一地块沒用药的也有类似症状什么原因？

回答： 天气好的很急阳光太强闪了叶子。你说的病斑是叶霉

提问42：异菌脲多菌灵给土壤可以吗

回答： 土壤消毒建议用：建议用甲霜.恶霉灵或者五氯硝基苯土壤。

提问43：扑海因异菌脲登记证号pDD乙蒜素登记证号PD85160～2

回答： 扑海因大概是真的乙蒜素估计是假货

提问44：异菌脲，链霉素稀酰吗啉，打洋葱给要得

回答： 可以的，防治霜霉病灰霉病及细菌性病害

提问45：茄子灰黴病，交替喷了异菌脲加的百菌清，喷好几次了咋就没效果呢？

回答： 再喷也效果不好、甚至越喷越严重、因为病菌对这些药有了抗性

提问46：茄子，用异菌脲加入天然芸苔素同喷防治效果更佳，是这样吗

回答： 如果预防可以如果治疗，用抑菌脲个人认为效果不会佷好

提问47：20%20%悬浮剂，打在上什么药会有可能产生药害

【摘要】：为了选择适宜防治苹果柑橘斑点落叶叶病的杀菌剂,比较了三种杀菌剂对苹果柑橘斑点落叶叶病的田间防效结果表明:使用三种杀菌剂处理的病情指数均显著低於对照。在第一次施药后14d,10%多抗霉素可湿性粉剂和45%异菌脲悬浮剂的防效显著高于40%双胍三辛烷基苯磺酸盐可湿性粉剂,防效分别达到70.38%和65.25%,而40%双胍三辛烷基苯磺酸盐可湿性粉剂的防效仅为52.08%;在第二次施药后12d和第三次施药后11 d均与第一次施药后14d调查结果规律相同,即在第二次施药后12d,10%多抗霉素可濕性粉剂、45%异菌脲悬浮剂和40%双胍三辛烷基苯磺酸盐可湿性粉剂的防效分别为79.32%、77.95%和65.39%;在第三次施药后11d,10%多抗霉素可湿性粉剂、45%异菌脲悬浮剂和40%双胍三辛烷基苯磺酸盐可湿性粉剂的防效分别上升至80.27%、78.85%和67.98%,防效均有显著提升在实际生产中,可将10%多抗霉素可湿性粉剂和45%异菌脲悬浮剂作为田間防治的首选药剂,且该药剂对苹果树安全无药害,建议在田间推广应用。