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求高人指教：浸泡于福尔马林的动物组织中的DNA是否能完好保存下来
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本帖最后由 兽乡之守望 于
17:11 编辑
二：目前有哪些办法可以完好的把动物组织的DNA信息保存下来
三：纯理论上来讲，利用DNA是否真的可以复制出与原来一样的动物？
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1.很难，因为福尔马林会对DNA分子降解成核酸小分子，非中性的福尔马林还会对DNA和其附近蛋白质产生交联
2.任何一个动物，身体内每个细胞的DNA都是相同的，不同组织当然更是相同的，最好最有效的方法是直接利用PCR等技术对基因进行提取测序，记入DNA文库，比如人类基因组计划之类的，现代实验室常用的果蝇，斑马鱼的基因组早就有了现成的DNA文库。简单的方法是直接低温快速冷冻，这样不仅对DNA，对蛋白质都损坏很小，不过得保证长久低温不断电。
3.做梦去吧，要是能的话现在人类早就是上帝了，直接用DNA制造各种动物就行了，也犯不着用体细胞核加去核受精卵母细胞做什么克隆了。。。和你说的DNA创造生物相比，克隆就是儿戏啊！别说大型生物（能用福尔马林泡的基本上不会太小），就是大肠杆菌，也不能纯人工拿DNA序列合成！
当然，现在不能不代表未来不能，很多时候动物学家保存DNA序列更多是为了未来某个时刻的可能性。
不过相信我，这种技术还是没有更好，有了的话产生的伦理混乱绝对超出99.999%中国人的极限想象能力
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
1.很难，因为福尔马林会对DNA分子降解成核酸小分子，非中性的福尔马林还会对DNA和其附近蛋白质产生交联
问一下：现有的克隆需要动物的体细胞核，那么仅有该动物的基因测序数据，而没有体细胞的实体，也无法克隆了？
该用户从未签到
问一下：现有的克隆需要动物的体细胞核，那么仅有该动物的基因测序数据，而没有体细胞的实体，也无法克隆 ...
对的，克隆在生物学的定义就是“用体细胞来离题培养出另一个完整个体”，理论依据是动物细胞的潜在全能性（植物细胞的全能性是可以自然表达的，动物细胞在自然条件下从不表达）。
而不是像大家理解的那种，用基因组信息，和基本的无机盐或简单有机物，在实验室条件下制造生命。。。那不叫克隆，那叫扮演上帝。。。当然，这主要是当时媒体本身不理解克隆，造成的以讹传讹。
而且即使这种克隆，目前已经公布的技术，也无法在完全体细胞的情况下独立发育，细胞质还必须用受精卵细胞的细胞质，只是细胞核可以用普通体细胞。当然，我个人猜测完全用体细胞的技术已经有了，只是不敢公布而已。
但距离你想的那种制造生物，还太远了。。。
签到天数: 342 天[LV.8]以坛为家I
希望不要乱搞，造出个擎天柱、威整天什么的
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
1.很难，因为福尔马林会对DNA分子降解成核酸小分子，非中性的福尔马林还会对DNA和其附近蛋白质产生交联
兄弟太专业了！膜拜一下，德迷联盟真乃卧虎藏龙之地！
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
1.很难，因为福尔马林会对DNA分子降解成核酸小分子，非中性的福尔马林还会对DNA和其附近蛋白质产生交联
以前看过类似挖到某动物骨骼，利用骨骼进行DNA鉴定的报道。那么这个用来测定的应该是骨髓吧。
想问：1在动物被自然掩埋的情况下，其闭合的骨骼里的骨髓，能够长期保存“活力”么？
2骨髓里的DNA细胞可用于现有的的克隆技术上么？
签到天数: 623 天[LV.9]以坛为家II
对的，克隆在生物学的定义就是“用体细胞来离题培养出另一个完整个体”，理论依据是动物细胞的潜在全能性 ...
细胞质用的是卵细胞，不一定是受精卵吧。
完全用体细胞的技术我觉得现在不太可能有，这可是一个有本质区别的飞跃，现在本质上来说只是代入。应该还差得远。
至于伦理问题，是够头痛的，就算不考虑克隆的因素，只要有一天胚胎培育可以不依赖子宫了，所产生的伦理问题就够颠覆性了。
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细胞质用的是卵细胞，不一定是受精卵吧。
完全用体细胞的技术我觉得现在不太可能有，这可是一个有本质区 ...
额。。。你说得对，我一着急打错了，卵细胞即可，不受精也行。。。
& & 但完全用体细胞我觉得真的差不多有了
& & 你想啊，从受精卵到“体细胞核+卵细胞质”的技术飞跃，和从“体细胞核+卵细胞质”到“体细胞核+体细胞质”的技术飞跃，两者相比，前者比后者不知难了多少倍啊（毕竟真核细胞的核内改造和细胞层面的细胞质改造相比应该更难）
& & 而克隆羊多利出现到现在都多少年了，这方面研究主要是欧洲国家为避免引起伦理问题，一直回避，美国不回避，但真研究出来的话如果技术不成熟也未必会着急公布。（公布了可能提前引起社会舆论反对，对其进一步研究造成实质障碍）
& & 至于伦理问题，我觉得不依赖子宫是早晚的事了，印度的代孕工厂听说过吧，子宫毕竟只是发育环境，人为模拟这种环境只是技术问题，未来大家把孩子人工环境培养发育我觉得情有可原吧，我个人觉得底线应该是不能扮演上帝，直接制造生命。。。哎，越说越可怕。。。这也是生物学的悲哀，不发展，一点前途都没有，一发展，就触及伦理底线。。。
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
额。。。你说得对，我一着急打错了，卵细胞即可，不受精也行。。。
& & 但完全用体细胞我觉得真的差不 ...
记得黑客帝国里描述的未来，被机器统治的人类像作物一样在巨大的机械田被“培养”出来然后被机器收割起来用来发电，如果真的可以直接脱离母体创造生命的话，听起来和你形容的差不多了。
该用户从未签到
以前看过类似挖到某动物骨骼，利用骨骼进行DNA鉴定的报道。那么这个用来测定的应该是骨髓吧。
想问：1在 ...
1.这个得看掩埋条件，温度，PH，压强都有影响，主要我不知道你说的长期是指多长？几百年几千年的话肯定没问题，但千万年就不行了。。。
2.恕我无知，“DNA”细胞是个什么东西？&&任何体细胞都有一套完整相同的DNA，所以任何体细胞理论上都可以，但越是分化程度低的，越容易，骨髓内的造血干细胞分化程度很低，理论上应该更容易。
3.你在留言板上问我的问题，我想最好把你现在想要做什么说清楚吧，不然分子生物学多少算是高精尖的学科，很难给你满意答案
该用户从未签到
记得黑客帝国里描述的未来，被机器统治的人类像作物一样在巨大的机械田被“培养”出来然后被机器收割起来 ...
是啊，要不早说生物学一发展就容易触碰伦理底线呢。。。
不过你说的黑客帝国那段我认为多少算这个神作里的一个小败笔吧。
因为单纯用来发电的话，用营养液培养人体发生物电的效率简直微乎其微，还不如直接传统燃烧火电的效率高呢。。。我猜应该是还有很多别的目的，当时没给翻译完全吧
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
是啊，要不早说生物学一发展就容易触碰伦理底线呢。。。
不过你说的黑客帝国那段我认为多少算这个神作里 ...
请教下：土葬三四天后动物肉体已经腐烂，此时取其骨头是否还有价值，骨头内的DNA组织是否已经被破坏？
该用户从未签到
请教下：土葬三四天后动物肉体已经腐烂，此时取其骨头是否还有价值，骨头内的DNA组织是否已经被破坏？
大哥，我能不能知道你到底想干什么？能把你的目的告诉我吗？
土葬三四天后啥DNA也不能完全降解，除非焚烧，所以如果保存好的话肯定没问题，不过土葬的话各种微生物都在入侵组织，在几百种不同生物的DNA中找你想要的那个，还是需要一些技术难度的
该用户从未签到
这问题太高端了&&我只知道市场上卖的看着特别鲜亮 新鲜的鱿鱼都是福尔马林泡出来的 其他海鲜比例也很大&&只是鱿鱼几乎百分之百是
签到天数: 623 天[LV.9]以坛为家II
额。。。你说得对，我一着急打错了，卵细胞即可，不受精也行。。。
& & 但完全用体细胞我觉得真的差不 ...
你说的没错，不依赖子宫从技术上距离并不远，也许哪天就有成熟技术了。
而一旦这一天到来，无需涉及克隆，伦理上带来的冲击就很可怕了。或者说这一层才是最可怕的。。
由于获得受精卵本身很简单，所以创造生命就变得很简单，父母的概念将彻底淡化（如同在人工受精的情况下父亲的概念已经淡化）。
更可怕的是生命可以被量产了，甚至是为了一些特殊目的。。
怎样界定一个合法的生命，这个问题也将被颠覆，从受精卵发展到什么阶段？或者是脱离人工培育环境获得感官开始？
如果故意让已经培育成熟的婴儿继续处于培育状态而不唤醒，甚至身体长到成年（是的，有一天见怪不怪后人和小白鼠区别并不大了）
而且，到时候再做基因实验、克隆试验也会变得方便无数倍
签到天数: 623 天[LV.9]以坛为家II
本帖最后由 truelie 于
21:40 编辑
记得黑客帝国里描述的未来，被机器统治的人类像作物一样在巨大的机械田被“培养”出来然后被机器收割起来 ...
所以脱离母体培育，比克隆的概念更可怕。
只要不能脱离母体，克隆可以看作一种特殊的人工受精。
实现脱离母体可能就已经突破底线了。
签到天数: 1 天[LV.1]初来乍到
所以脱离母体培育，比克隆的概念更可怕。
只要不能脱离母体，克隆可以看作一种特殊的人工受精。
应该是克隆体的概念更可怕吧。
脱离母体培育的伦理冲击人类已经经受过了，并且在某种程度上认可了。那就是试管婴儿啊。
而且将会成一种趋势。就是未来的母亲为了回避因怀孕造成的生活中的种种不便，把十月怀胎的过程交由专业机构来完成。这个雄鹰已经说明的了。
其实从受精卵开始，一个生命就已经形成了。把怀孕过程交由代孕机构完成，无非相当于把孩子交给别的家庭去抚养，两者本质上没啥区别。
从社会学的角度而言，这种行为“为人父母”不合格，伦理有欠，从生物学上来讲父母亲的血缘关系完全没问题
但是克隆则是从生物学这个层次就颠覆了父母亲概念的。
签到天数: 37 天[LV.5]常住居民I
真有高人啊！！
签到天数: 623 天[LV.9]以坛为家II
应该是克隆体的概念更可怕吧。
脱离母体培育的伦理冲击人类已经经受过了，并且在某种程度上认可了。那 ...
试管婴儿不是你想像的那样。所谓试管婴儿，最后还是要移植到母体中培育的。
代替母体的技术现在还没有。
如果真的能用设备代替母体了，事情绝对不是那么轻描淡写
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【求助】用10%福尔马林浸泡了很久的组织还能做免疫组化实验吗
页码直达：
这个帖子发布于4年零303天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位大侠，小鼠大脑在10%福尔马林中已经固定了4个月了，还能用来做免疫组化实验吗？若进行抗原修复还能挽回吗？一般做免疫组化的组织是不是现取现做最好？我是刚接触免疫组化的新手，请大家帮忙解决下，感激不尽。。。
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tk57ml 这位战友的情况是10%福尔马林泡几个月， 而不是10%福尔马林过夜，转sucrose 后放几个月这样的组织可以做形态学观察？福尔马林第一小时可以固定大概1cm厚的组织，往后只能每小时1mm的速度固定 就是因为那第一小时已固定的组织形成了一个硬壳 阻止固定液渗透（所以大组织或空腔器官需要切开预处理），我想小鼠的大脑直径没有大于1cm吧。所以充分固定的组织置于中性福尔马林里保存有什么问题呢？至少我想全国的病理科绝大多数都是这么干的。人体尸检标本福尔马林里保存十年拿出来都可以做形态学观察了。别说几个月了。要是做免疫组化肯定会对抗体表达有影响 所以不要拿固定时间不一样的样本做统计 但是做肯定是没问题的。
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时间有些长，没有人能保证能不能用。
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可用，小鼠的脑子小，第一时间即可充分固定。没有问题。
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看你的材料保存温度了，常温是效果不佳了如果4度的话，一般DAB染色的标本可以放置三个月没问题，标本没切过严格上不需要做抗原修复，只需充分漂洗即可。
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zhuxping163 看你的材料保存温度了，常温是效果不佳了如果4度的话，一般DAB染色的标本可以放置三个月没问题，标本没切过严格上不需要做抗原修复，只需充分漂洗即可。谢谢~我是4度冰箱保存的，漂洗要用什么漂洗呢，多长时间？我之前做常规石蜡切片的话脱水之前将组织先用自来水冲洗隔夜的，漂洗是不是也是这样啊？
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qxbgx 可用，小鼠的脑子小，第一时间即可充分固定。没有问题。这位战友的情况是10%福尔马林泡几个月， 而不是10%福尔马林过夜，转sucrose 后放几个月这样的组织可以做形态学观察？
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tk57ml 这位战友的情况是10%福尔马林泡几个月， 而不是10%福尔马林过夜，转sucrose 后放几个月这样的组织可以做形态学观察？福尔马林第一小时可以固定大概1cm厚的组织，往后只能每小时1mm的速度固定 就是因为那第一小时已固定的组织形成了一个硬壳 阻止固定液渗透（所以大组织或空腔器官需要切开预处理），我想小鼠的大脑直径没有大于1cm吧。所以充分固定的组织置于中性福尔马林里保存有什么问题呢？至少我想全国的病理科绝大多数都是这么干的。人体尸检标本福尔马林里保存十年拿出来都可以做形态学观察了。别说几个月了。要是做免疫组化肯定会对抗体表达有影响 所以不要拿固定时间不一样的样本做统计 但是做肯定是没问题的。
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qxbgx 福尔马林第一小时可以固定大概1cm厚的组织，往后只能每小时1mm的速度固定 就是因为那第一小时已固定的组织形成了一个硬壳 阻止固定液渗透（所以大组织或空腔器官需要切开预处理），我想小鼠的大脑直径没有大于1cm吧。所以充分固定的组织置于中性福尔马林里保存有什么问题呢？至少我想全国的病理科绝大多数都是这么干的。人体尸检标本福尔马林里保存十年拿出来都可以做形态学观察了。别说几个月了。要是做免疫组化肯定会对抗体表达有影响 所以不要拿固定时间不一样的样本做统计 但是做肯定是没问题的。首先，不是专门搞病理的，可能记错了固定时间过长的坏处之一是形成过多的cross link，这样的结果是即使抗原修复也有可能会导致假阴性结果。因此我知道的多数实验室都是8hrs~48hrs，4%PFA或10%福尔马林固定后，转梯度sucrose或者ethanol，然后4度或-20度保存。
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您说的是实验病理最正确的方法，但只要固定充分，福尔马林保存也没问题的。而且我们不是在讨论能还是不能吗？这样的标本我们做过，效果还是不错的，同样处理条件做半定量免疫组化分析也没问题。但不知楼主做的是什么marker，具体问题要具体分析了。
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楼主人呢？做出来结果如何？应该严格按照protocol来做实验。固定时间久了得到了好结果未必可信。即使结果好也应用正确方法重复确认再现性。以上。
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这要看楼主是混毕业还是严谨搞科研了。但是福尔马林固定的标本做科研课题的多得是，国内有 国外也有 尤其是人体组织。
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漂洗就是用0.1MPBS或0.01M的PBS，我们用下来组化实际差别不大，在组织切片后，最好是冰冻片，因为石蜡再过一道的话，就算修复估计效果也难说了，用大的培养皿，摇床慢速，溶液多些10-15MINX3，或者多洗几遍。如果你标的抗体是表达比较强的或者不是膜抗体，那么应该还是可以用的。
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peterlord 楼主人呢？做出来结果如何？应该严格按照protocol来做实验。固定时间久了得到了好结果未必可信。即使结果好也应用正确方法重复确认再现性。以上。实验还没做，正在讨论准备阶段，我是想做TH免疫组化来着，就是担心组织泡久了是不是不能做了，看了大家的讨论，我想应该可以做做试试看
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有TH免疫组化经验的朋友吗，帮我看下这个免疫组化切片实验步骤是否可行，我的实验目的是观察切片，进行免疫阳性细胞计数
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qxbgx 这要看楼主是混毕业还是严谨搞科研了。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
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我觉得难，你石蜡在修复，然后双氧水再去除假阳性，估计剩不下什么了，建议你冰冻切两张，漂片充分清洗后别用双氧水，做一次看看，如果有结果再做石蜡，否则你浪费的时间就太多了
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