鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验_豆搜网
鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验
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鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验 随着养鸡业集约化、产业化的不断发展,疾病越来越多,细菌对抗生素的耐药性越来越强,在临床疾病防治工作中,要取得较好的治疗效果,需要选择对致病菌比较敏感的药物来进行预防和治疗,达到有效控制疾病的目的.为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播,我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定,并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究,为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据. 关键词:大肠杆茵; 分离鉴定; 药敏 1 材料 1.1病料来源 采自 鸡场150~200日龄有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死蛋鸡的肝脏、脾脏、心血等. 1.2 培养基 普通琼脂培养基与普通肉汤培养基[LB培养基:固体:胰蛋白胨1.0g加入酵母提取物0.5g、NaCl0.5g,、琼脂粉1.5g使其充分溶解,高压灭菌,铺板并保存于4℃".液体:胰蛋白胨1.0g加入0.5g酵母提取物、0.5g NaCl,然后定容至100ml,高压灭菌,4℃保存] 麦康凯琼脂培养基 水解酪蛋白(MH)培养基 三糖铁琼脂(蛋白胨20g,牛肉浸膏5g,乳糖10g,蔗糖10g,葡萄糖1g,NaCL5g,硫代硫酸钠0.2g,硫酸亚铁0.2g,琼脂粉20g,加热溶解后PH调至7.4加入0.4%酚红水溶液6.3ml蒸馏水定容1000ml,分装4-5ml灭菌,制成底层较深的斜面) 胰蛋白胨水溶液(蛋白胨2.5g,NaCL 1.25g,蒸馏水调至7.6,分装灭菌) 葡萄糖蛋白胨水溶液(7.6的邓亨氏蛋白胨水中加葡萄糖1g,溶解后分装1ml每管,灭菌) 1.3 仪器与器材 超净工作台,天平、接种环,平皿,试管,灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、离心机、细菌微量生化反应器、pH计 、旋涡混合振荡器 96孔板 、灭菌试管、容量瓶、刻度吸管、接种环、移液器和吸头等 生化发酵管(葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、尿素分解管、硫化氢、枸橼酸盐、赖氨酸、苯丙氨酸、鸟氨酸、半固体琼脂、蛋白胨水、木糖、葡萄糖磷酸盐、山梨醇等) 1.4 药物与试剂 琼脂,肉汤,麦康凯琼脂,95%酒精、甲基红、α萘酚酒精、氢氧化钾、结晶紫、草酸铵、碘化钾、碘片、复红、MH肉汤、MH琼脂 M-R试剂(用95%酒精60ml溶解0.02g甲基红,定容100ml) V-P试剂(甲:5%α萘酚酒精溶液;乙:40%氢氧化钾水溶液,装于棕色瓶,4℃保存) 草酸铵结晶紫染液(A液:结晶紫2g研细后加入95%酒精20ml使之溶解;B液:草酸铵1g溶于100ml蒸馏水,两液混合) 革兰氏碘液(2g碘化钾溶解于少量水中,加入1g碘片使之完全溶解,定容300ml) 复红染液(2.5ml复红加100ml酒精,取混合液10ml加80ml蒸馏水) 2. 大肠杆菌的分离鉴定 2.1大肠杆菌的分离培养 无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织,划线接种于普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板及普通肉汤,37℃培养18~24h,挑取可疑菌落接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上,37℃培养18~24再挑取粉红色单个菌落再接种在麦康凯琼脂平板/普通琼脂上分区划线,37℃培养18~24h.连续纯培养3代,得到纯培养物. 2.2 细菌形态学观察 挑取表面光滑,边缘整齐,灰白色半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美兰琼脂平板,于37℃培养20h,观察结果. 2.3 革兰氏染色 用接种环挑取一环生理盐水放于玻片上,再挑少量纯培养物与玻片上生理盐水混合,并均匀涂布玻片上,自然干燥后滴加草酸铵结晶紫染液,1-3min后水洗;加革兰氏碘液媒染1min,水洗;加95%酒精脱色15-30S,水洗;加分红复染1min,水洗,自然干燥后镜检.观察细菌染色与形态特征. 2.4 生化试验 挑取麦康凯琼脂上长出的红色菌落接种于生化试验微量发酵管中,37℃培养24-48h,并记录试验结果. 2.4.1三糖铁琼脂(TST)接种 用接种针挑取单个菌落,划线接种于培养管中(自下到上S型划线),再将接种针垂直插入半固体培养基中央,穿刺到培养基底部,然后沿原穿刺线退出接种针,37℃培养24h,换茬结果. 2.4.2糖(甘、醇)类发酵试验 挑取纯培养物接种于微量发酵管中,倒置37℃培养24-48h,观察结果.若能分解此种糖类产酸,指示剂显酸性变化,发酵管种颜色发生变化,不分解此种糖类无颜色变化,产气可使倒置小管内产生气泡. 2.4.3吲哚试验 挑取纯培养物接种于蛋白胨水培养基,37℃培养3-5d.先加少量乙醚,要懂事管以萃取和浓缩吲哚使其浮于培养基表面,再沿关闭加入欧-波二氏试剂数滴,接触面橙红色的为阳性反应. 2.4.4 M-R试验 挑取纯培养物接种于葡萄糖蛋白胨水培养基,37℃培养3-5d,加甲基红2滴立即观察结果,红色为阳性,黄为阴性. 2.4.5 V-P试验 挑取纯培养物接种于葡萄糖蛋白胨水培养基,37℃培养3-5d,加等量的V-P试剂(先加甲液再加乙液)混匀观察结果,红色为阳性,不为红色为阴性. 2.4.6 枸橼酸盐利用实验 挑取纯培养物接种于微量发酵管中,倒置37℃培养24-48h,观察结果.若能利用枸橼酸盐则发生颜色变化,反之无颜色变化 2.4.7 尿素分解试验 挑取纯培养物接种于尿素培养基,37℃培养过夜,如培养基呈粉红指示剂碱性反应深红色为阳性,如浅红色或培养基中葡萄糖发酵产酸而呈酸性反应黄色为阴性 2.4.8 硫化氢产生试验 挑取纯培养物接种于硫化氢生化培养管中,37℃培养过夜,如变为黑色为阳性反应. 2.5 致病性试验 2.5.1 动物分组及处理 1 日龄鸡10 羽,空白饲养14 d 经血液检查无细菌感染后,于15 日龄随机分为2 组,分别为腹腔组和对照组,每组5羽.鉴定出的大肠杆菌接种于营养肉汤培养基,37℃振荡培养18 h,4 000 r /min 离心20 min, 用灭菌生理盐水配制细菌浓度为3*108cfu/mL 菌悬液备用.腹腔组雏鸡经腹腔内注射途径接种上述制备大肠杆菌菌悬液,每羽0.5 mL.对照组常规饲养管理,不作处理. 2.5.2 临床症状观察及样品处理 感染后每天上、下午各记录一次雏鸡的最早死亡时间和死亡数,剖检观察病变,并以心血、肝脏、脑作细菌分离、鉴定,感染后7 d 扑杀仍存活的雏鸡剖检观察病变并作细菌分离鉴定.采取脾脏、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脑、胸腺、法氏囊置于10%中性福尔马林溶液中固定,备作组织病理学观察. 2.5.3组织病理学观察 对采取的组织进行常规石蜡包埋、切片、HE 染色,最后在光学显微镜下观察结果 2.6 菌体O抗原鉴定(玻板凝集法) 大肠杆菌目前有164个O抗原(O1~O171)、72个K抗原(K1~K1O3)和55个H抗原(H1~H57),已发现的血清型至少有几千种.因此,该菌的血清型鉴定是以O抗原、K抗原、H抗原三种抗原作为基础的. 以适量生理盐水将平板中细菌洗下,转移至1.5ml离心管中,10000r/min 5min,弃去上清,沉淀用0.5ml生理盐水震荡混匀,10000r/min 5min,重复洗涤3次弃去上清,沉淀用0.5ml生理盐水震荡混匀制成悬液,灭菌. 分别取O抗血清1滴滴于载玻片上,取菌株50μl混匀,上下摇动数次1-3min观察结果.同时用灭菌生理盐水设对照组以检查细菌自凝现象 或伊红美兰琼脂上长 的黑色带金属光泽的菌落,做药敏试验.取对照株O.、O:、O 作对照.均置,观察结果. 3 药敏试验 3.1抗菌药物贮备液的制备 一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度,按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数.如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水.此溶液液即为用于做试验药液. 抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度.溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度. 将制备好的抗菌药物贮备液分装于无菌小瓶中,-70℃以下保存,有效期为半年.注意不能反复冻融.临用前从冰箱中取出,使融解并与室温一致. 3.2 0.5麦氏单位标准比浊液的配制: 取0.048mol/L的Bacl2溶液(1.175%w/v,Bacl2 2H2O)0.5ml,加至99.5ml 0.18mol/L的H2SO4溶液(1%v/v)中,不断搅拌使成混悬液.用1cm光路的吸收池,在625nm下测定,0.5标准麦氏单位的吸收度应为0.08~0.10. 取4~6ml硫酸钡混悬液,置与稀释菌悬液相同规格的具塞试管中,密封,室温避光保存.临用前将标准比浊液在漩涡震荡器上混合均匀,如出现大颗粒,则需重新配制.应用时,可目测或使用比浊仪即可. 3.3接种物的制备 将待检菌接种于普通营养琼脂平板和麦康凯琼脂培养基,37℃培养16~18h,然后用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个,接种于4-5ml的MH肉汤中,35℃孵育2-6h.增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准,约含1~2*108CFU/ml.将调节至0.5麦氏单位的菌液用M-H肉汤或生理盐水稀释100倍,约5X105-106CFU/ml浓度. 3.4常量肉汤稀释法测定药物的MIC 微量肉汤稀释法测定细菌最小抑菌浓度是定量检测某一抗生素对细菌体外活性的一种标准方法.试验在制成一系列各种浓度的抗生素肉汤溶液中分别加入等量的一定浓度的菌液,过夜培养后,判读最小抑菌浓度(MIC). 3.4.1抗菌药物的稀释及菌液接种 取无菌试管13支,排成一排,第1管加入1.6ml的MH肉汤,其余每管加入MH肉汤1ml,在第1管加入抗菌药物原液(如1280μg/ml)0.4ml混匀,然后吸取1ml至第2管,混匀后再吸取1ml至第3管,如此连续倍比稀释至第11管,并从第11管中吸取1ml弃去,第12管为不含药物的生长对照.此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml.然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml,使每管最终菌液浓度约为5*105CFU/ml.第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml.同时设阳性对照管和阴性对照管 将抗菌药物贮备液用MH肉汤稀释至一定的工作浓度后,按2倍稀释法进一步稀释至一系列所需浓度(一般10个浓度梯度).取稀释至5X105-106CFU/ml的菌液0.1ml分别加入含系列抗菌药物溶液的板中, 混匀,试管中最终抗菌药物的浓度为原稀释浓度的一半. 3.4.2 孵育 将接种好的稀释管塞好塞子,置35℃普通空气孵箱中孵育16~24h. 3.4.3结果判断与解释 首先检查生长对照管的细菌生长情况是否良好,同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染.然后以肉眼观察,以无菌生长的最低抗菌药物溶液的浓度为MIC. 按判断标准判断被检菌株的敏感性-敏感,中度敏感或耐药.对于只给出敏感判断标准的药物,只报告其是否敏感即可. 根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的分界点值标准,判断耐药(R,)、敏感(S)或中介(I).S表示被测菌株所引起的感染可以用该抗菌药物的常用剂量治疗有效,禁忌症除外.R指该菌不能被抗菌药物的常用剂量在组织液内或血液中所达到的浓度所抑制,或属于具有特定耐药机理,所以临床治疗效果不佳.I是指MIC接近药物的血液或组织液浓度,疗效低于敏感菌.还表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制,或在药物生理性浓集的部位被抑制.另外,中介还作为"缓冲域",以防止由微小的技术因素失控,所导致较大的错误解释. 3.4.4注意事项 调整好浊度的菌液应于15分钟内稀释至工作浓度. M-H肉汤是常规药敏试验中的最佳培养基,含磺胺,甲氧苄啶和四环素抑制剂较少,能满足大多数快速生长的需氧菌或兼性厌氧菌的营养需求. 如分离的菌种不典型或试验结果前后不一致时,应对菌种重新鉴定或重新做药敏测定. 3.5 微量棋盘稀释法测定药物的FIC 分级抑菌浓度(n,FIC)指数为抗菌药药效学(PD)参数之一,是两种抗菌药的联合药敏(两种抗菌药同时使用时,可出现协同、颉颃、无关和耐药四种情况)指标. 棋盘稀释法包括微量棋盘稀释法、试管棋盘稀释法和琼脂棋盘稀释法三种,其中微量棋盘稀释法为最常用的联合药敏方法之一.它常使用96孔无菌微孔板,每种抗菌药物最高从2倍MIC浓度开始用灭菌MH肉汤倍比稀释,一般取6~8个稀释度左右,各取50μl分别排列在平板的行与列上,然后在无菌微孔板中加入100μl菌液,使最终接种量为5*105CFU/ml,过夜培养,无细菌生长的最低药物浓度为MIC.通过计算部分抑菌浓度指数(n,FIC)判断相互作用.FIC=联合用药时甲药MIC/单独应用甲药时MIC+联合应用乙药时MIC/单独应用乙药时MIC,FIC指数为≤0.5、>0.5~1、>1~2、>2时分别表示协同、相加、无关、拮抗作用;也有文献将FIC指数≤0.5定义为协同,>0.5~4定义为相加与无关,>4定义为拮抗.与棋盘稀释法不同的是,试管、琼脂棋盘稀释法分别在试管及含有不同药物浓度的琼脂平板上进行. 3.5.1试验方法: 用微量移液器将药物加入96孔板内,其中第1至第8行的第1列(孔)至第10列(孔),从高浓度到底浓度一次加入A药液各50μl;第1列至第10列的第1行(孔)至第8行(孔)为B第3至第10个倍比稀释度的系列药物50μl,分别加入100μl菌悬液和MH肉汤,35℃孵育16-20h,观察结果. 4 结果与分析 4.1 病鸡及病死鸡的病理剖检变化 病鸡肝脏肿大、质脆,有点状坏死灶,表面覆盖有黄白色的纤维素性渗出物;脾脏肿大,肺充血、淤血,部分鸡肺脏有l~2mm大小坏死灶;肾脏肿大,有尿酸盐沉积;十二指肠有出血性肠炎变化;盲肠扁桃体肿胀、出血. 4.2细菌分离 分离菌的培养特性及形态特征: 经37℃培养24~48 h,在麦康凯琼脂上形成红色、圆形、隆起、光滑湿润、边缘整齐的中等大菌落;在普通琼脂斜面上为灰白色菌落. 4.3细菌形态学观察 取培养物涂片,革兰氏染色,镜检均可见两端钝圆,多数散在排列,偶尔有2~3个连在一起的革兰氏阴性短杆菌. 4.4生化试验结果 生化试验结果显示分离的大肠杆菌对大多数糖类(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖、甘露糖)产酸产气,不利用蔗糖;三糖铁试验产酸变黄,管底产气,不产生硫化氢;吲哚试验阳性;MR试验阳性;VP试验阴性;不能产生硫化氢和分解尿素;枸橼酸盐试验为阴性.此结果符合大肠杆菌的特性. 4.5致病性试验 试验组 对照组均健活???.剖检可见肝脏肿大、边缘钝圆、肠道弥漫性出血.采用营养琼脂平板,37℃培养20h,在平板上形成圆形隆起、光滑、无色透明、边缘整齐的小菌落.挑取单个菌落作生化实验符合上述生化反应结果. 4.6 O抗原测定结果 通过波板凝集试验,测得2个菌株的O抗原的类型都为O2 4.7 药敏试验结果 4.7.1 MIC试验 4.7.2 FIC试验 5 讨论 附录 1 0.048M BaCL2?2H2O 10ml 0.12g BaCL2?2H2O加入9ml水定容至10ml 2 0.18M H2SO4 100ml 90ml水加入9.78ml H2SO4定容至100ml MIC和FIC测定试验 一、MIC和FIC测定技术路线 制备抗菌药物储备液和0.5麦氏单位标准比浊液 病料或菌种接种于固体培养基 37℃培养18h 菌落接种液体培养基 培养6h 比浊 ①(MIC)稀释抗菌药物 接种菌液 37℃培养18-24h 观察并记录结果 ②(FIC)稀释抗菌药物的MIC 接种菌液 37℃培养18-24h 判定结果并计算 二、预期试验进度 MIC做16种药物,FIC做12个组方 5月19日―-5月21日:试验准备(用具清洗、灭菌;制备抗菌药物储备液;制备0.5麦氏单位标准比浊液等) 5月23日―5月28日:预实验 5月30日―6月11日:MIC试验(一批四种药物) 6月13日―6月30日:FIC试验(前提是有充足的96孔板或是小试管) 三、 影响因素 1、培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基.培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径.其次,倾注平板时,厚度应合适(约4-5mm),不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜.培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性,琼脂凝固后塑料包装放4℃保存,在5日内用完,使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴.倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3).pH过低会导致氨基糖苷类,大环内酯类失效,而青霉素活力增强. 2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性. 3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果 4、培养时间:一般细菌培养温度和时间为37℃ 12-24小时 四、可能出现的问题及注意事项 1. 挑取的菌落可能混有杂菌或是挑取错误菌落,会导致实验结果不准确或是实验失败. 2. 接种细菌要无菌条件下均匀涂抹,每次用过的接种环要灼烧,待冷却后方可使用. 3. 接种时,应由低浓度向高浓度平板依次接种,最后接种对照平板. 4. 二倍稀释法测定MIC时要注意稀释顺序,每次移液前要清洗试管或是更换枪头. 5.???为了保证平板受热均匀,培养时平板堆放不得超过4个. 五、需要购买的东西 MH肉汤1瓶 平底96孔板6-8块(或是小试管600-800个) 麦康凯琼脂1瓶(原有的已经过期,试验过了不好用)
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需立即切除移植物。2. 急性排斥反应：最常见，表现多有发热、移植部位胀痛和移植器官功能减退；病理特点是移植物实质和小血管壁上有以单个核细胞为主的细胞浸润、间质水肿与血管损害，后期在大动脉壁上有急性纤维素样炎症。免疫抑制治疗多可缓解。3. 慢性排斥反应：属于迟发型变态反应，为急性排斥细胞坏死的延续；炎性细胞相关的慢性炎症；抗体和细胞介导的内皮损伤；管壁增厚和间质纤维化。用免疫抑制治疗无明显临床效果。
简述志贺氏菌属的生物学性状及临床意义。生物学性状：形态与染色 革兰阴性短小杆菌，无荚膜，无芽孢，无鞭毛，有菌毛。培养：需氧或兼性厌氧，液体培养基中浑浊生长，普通平板和SS 上形成中等大小，半透明的光滑型菌落。分解葡糖糖产酸不产气，不分解乳糖，吲哚试验阴性，H2S 阴性,MR 试验阳性，VP 试验阴性，不产生赖氨酸脱羧酶，不能利用柠檬酸盐，氧化酶试验阴性，动力阴性。有O 抗原无鞭毛抗原，个别有K 抗原。临床意义：致病因素为侵袭力、内毒素及外毒素，可引起人类细菌性痢疾，小儿易引起慢性中毒性痢疾。
简述沙门菌属的生物学性状及微生物检查。生物学性状：无芽孢，无荚膜，革兰阴性直杆菌。多数有菌毛。营养要求不高，普通琼脂培养能生长，SS 和麦康凯平板上培养可形成2~4mm的透明或半透明菌落，对胆盐耐受，产H2S 者在SS 上形成黑色中心。不发酵乳糖，不产靛基质，不分解尿素，甲基红+,VP-，大多产H2S ，发酵葡萄糖产酸产气。有O 抗原，H 抗原，Vi 抗原。变异性：S-R 变异，H-O 变异，相位变异，V-W 变异。致病性：有侵袭力、内毒素和肠毒素。可引起胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症。
试述霍乱弧菌的生物学性状及微生物学检验。
生物学性状：呈弧形或逗点状，无芽孢有菌毛，有些菌株有荚膜。一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼，米泔水样便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动，液体培养物染色镜检，可见鱼群样排列。需氧或兼性厌氧菌，普通培养基生长良好，耐碱不耐酸。常用PH8.5碱性蛋白胨水增菌。均能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、产酸不产气，迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。氧化酶、明胶酶试验和ONPG 均阳性，产靛基质，霍乱红反应阳性。
有特异性O 抗原和不耐热的非特异性H 抗原。有形态变异，菌落变异，溶血性变异和毒力变异。对热、干燥、日光、酸、消毒剂敏感，但耐碱力强。
微生物检验：标本采集以粪便为主，用药前采取。一般米泔水样便采取1-3毫升，成形便取蚕豆大小。采集的标本及时接种适宜的培养基。
检验方法：1）直接镜检 ①动力观察 ②制动试验 ③涂片染色2) 分离培养①直接分离培养②增菌后分离培养3）鉴定 以血清学玻片凝集为主结合形态学，生化反应作出判断。 46.
试述厌氧菌标本的采集与运送的注意事项。多用特殊的采集方法，如针筒抽取等，应严格无菌操作，严禁接触空气。不同部位采集方法各有不同。送检方法与处理：标本送达实验室后，即时处理，最迟不超过2小时①针筒运送②无菌小瓶运送③棉拭子运送④厌氧罐或厌氧袋运送
试述破伤风杆菌的感染条件、致病机制和防治原则。
⑴感染条件：破伤风梭菌是一种非侵袭性细菌，芽孢广泛分布于自然界中，一般不引起疾病。当机体存在窄而深的伤口，或伴有需氧菌及兼性厌氧菌的同时感染，或坏死组织多、泥土或异物污染伤口而形成局部缺血，缺氧。造成局部厌氧环境，有利于破伤风梭菌的繁殖。 ⑵致病机制：破伤风梭菌感染易感伤口后，芽孢发芽成繁殖体，在局部繁殖并释放破伤风痉挛毒素及破伤风溶血素。前者作用于脊髓前角运动细胞，封闭了抑制性神经介质，导致全身肌肉强直性收缩出现角弓反张(破伤风特有的症状) 。
⑶治疗原则: ①正确处理创口，包括清创、扩创等，防止厌氧微环境②尽早注射破伤风抗毒素，也可同时给予类毒素⑶采用四环素、红霉素等进行抗感染治疗。儿童应采用白百破三联疫苗进行接种预防。 48.
试述结核菌素试验原理、结果分析及实际应用。
⑴试验原理： 测定机体对结核菌的迟发型超敏反应，以此判断机体有无抗结核免疫力。取0T(旧结核菌素) 或PPD(结核菌纯蛋白衍生物)5单位(0.1ml)，于前臂皮内注射。
⑵结果分析： 48-72小时后观察结果，局部出现红肿和硬结，且大于5mm 者，为阳性，表示机体细胞免疫功能正常，曾感染过结核分枝杆菌。位皮试为阴性者，若机体细胞免疫功能正常，表示未感染过结核分枝杆菌。
⑶该试验可应用于四个方面：①选择卡介苗的接种对象，并作为接种卡介苗后免疫效果评价的指标；②婴幼儿结核病诊断的参考指标；③评价肿瘤患者非特异性细胞免疫功能的指标； ④人群中结核菌感染的流行率调查。
试述梅毒螺旋体生物学特性、致病性、微生物学检验。
⑴生物学特性：毒螺旋体是密螺旋体，菌体纤细，两端尖直，有8~15个呈锐角弯曲而规则的螺旋，暗视野显微镜观察运动活泼，镀银染色法染成棕褐色，不能在人工培养基上生长。 抗原成分有特异性抗原和类属抗原。
抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感，对化学消毒剂也敏感，对青霉素，四环素，红霉素，庆大霉素均敏感。⑵致病性：梅毒是由梅毒螺旋体引起的慢性传染病。临床病程分三期。传播途径是性接触，母婴，输血等。⑶微生物检验：①直接镜检，硬下疳或梅毒疹渗出液暗视野显微
镜直接镜检②血清学试验 包括非密螺旋体抗原试验：（VDRL 、RPR 、USR ）和密螺旋体抗原试验（FTA-ABS\MHA-TP\ELISA\免疫印迹试验）③核酸检测 50.
试述病毒的致病机理及抗病毒免疫包括哪些因素。
病毒的致病机理⑴细胞病变效应，抑制宿主细胞生物合成⑵影响细胞基因表达的调节 ⑶新抗原决定簇的形成，细胞融合⑷包涵体的形成，免疫病理性损伤
抗病毒免疫包括⑴天然抵抗力 屏障作用，炎症反应和干扰素⑵特异性免疫 体液和细胞免疫 51.
试述干扰素的类型，抗病毒机理，特点及应用。
⑴类型：IFN-α（主要由白细胞产生）、IFN-β（由成纤维细胞产生）、IFN-γ（由T 细胞产生）。 ⑵抗病毒机理：当干扰素作用于细胞后，促进其第21对染色体上的基因表达，产生抗病毒蛋白，主要有3种：2’-5’合成酶、合成蛋白激酶、磷酸二脂酶。
⑶抗病毒特点：有物种特异性、无病毒特异性；作用于细胞而非作用于病毒；作用的暂时性广谱性等。⑷抗病毒效能的应用：治疗病毒性肝炎、治疗人毛细胞白血病、肿瘤和其他病毒感染等。 52.
简要说明对乙型肝炎、丁型肝炎与丙型肝炎的预防策略和措施。
乙型肝炎、丁型肝炎与丙型肝炎均经肠道外传播。由于目前已经研制成功乙型肝炎基因工程疫苗，接种乙型肝炎疫苗能有效地预防乙型肝炎和丁型肝炎。接种乙型肝炎疫苗首要放在母-婴传播上，即新生儿出生24小时内、3、6月龄各肌肉注射5μg 。其次对暴露于血液的高危人群，也应实施上述0、1、6个月间隔的3针注射。此外，加强血源管理和筛查、避免医源性污染以及实行婚前检查等也是有效措施。丙型肝炎的母-婴传播率低，且目前尚无预防用疫苗，故丙型肝炎的预防宜采取加强血源管理，避免医源性感染为主的措施。 53.
人类对流感病毒和麻疹病毒的免疫力有何区别？为什么？
人感染流感病毒只对同型流感病毒产生短暂的免疫力；而感染麻疹病毒后则可获得持久的、牢固的免疫力。原因是：⑴流感病毒是局部感染，病毒不入血；而麻疹病毒是全身感染，有两次病毒血症，病毒抗原可和免疫系统广泛接触。⑵流感病毒有三个型别，尤其甲型流感病毒又可分为许多亚型，各型之间无交叉反应；而麻疹病毒仅有一个型别。
⑶流感病毒尤其是甲型流感病毒容易发生变异，而麻疹病毒的抗原习惯内稳定。 54.
体液免疫和细胞免疫在抗病毒免疫过程中的作用各有何特点？⑴体液免疫主要通过抗体对病毒懂得中和作用及调理作用阻止病毒的感染。抗体与病毒表面参与细胞吸附的蛋白质合成，阻止病毒与靶细胞相互作用，削弱病毒的稳定性，裂解病毒。⑵清除机体内感染的病毒、溶解被病毒感染的细胞或刺激抗体生成及炎症反应。
比较真菌孢子与细菌芽胞的区别。
产生数目 一根菌丝可产生多个 一个细菌只产生一个
细胞内或细胞外
对热抵抗力
60~70℃短时间死亡
100°C 沸水中杀死芽孢需1~3h
为真菌的繁殖体
细菌在不良环境下产生的休眠形式
皮肤癣菌为何能引起皮肤癣病？对癣病患者如何进行微生物学诊断。
因皮肤癣菌具有嗜角质蛋白的特性，故多侵犯角化的表皮、毛发和指甲，引起手（足）癣、发癣及甲癣，病理变化是由真菌的增殖及其代谢产物刺激引起的。
皮肤癣病的微生物学诊断：①取患者屑、指甲屑或病发，经10%KOH消化后镜检。②皮屑、甲屑中见有菌丝，病发内或外可见有菌丝和孢子，即可初步诊断有皮肤癣菌感染。③再经沙保培养基或碎片小培养后，可根据菌落特征、菌丝和孢子的特点鉴定是何皮肤癣菌。 57.
简述常见性传播疾病及其病原体。
常见性病主要是指仅包括梅毒，淋病，软下疳及性病淋巴肉芽肿等四种，亦称经典性病。
螺旋体梅毒螺旋体
淋病奈瑟氏菌
杜克雷氏嗜血杆菌
肉芽肿荚膜杆菌
腹股沟肉芽肿
衣原体 性病淋巴肉芽肿
衣原体性病淋巴肉芽肿
沙眼衣原体
非淋病双球菌性尿道炎 支原体 T株支原体或解脲支原体
生殖器支原体感染
简述细菌耐药机制。⑴产β内酰胺酶⑵产生钝化酶⑶青霉素结合蛋白的改变⑷药敏作用靶位的改变⑸抗菌药物渗透障碍
简述质控图的一般原理。
将质控品测定结果与已知值进行比较的最常用的方法是使用质控图。
质控图是一种简单的图形，其显示的是当获得质控结果时按照时间的顺序将结果标在图上。 已知值代表的是值的可接受范围，在图中由上下控制界限线表示。 当描的点落在质控界限之内是，一般解释为方法工作正常。 当点落在质控界限范围之外表示存在问题。
质控界限由受控的特定分析方法对已知标本作重复测定获得结果的平均值和标准差计算。
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