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临床实验室质量管理课件讲义，管理是对组织的资源进行有效整合以达到组织既定目标与责任的动态创造性活动。计划、组织、领导、控制等行为活动是有效整合资源的部分手段或方式，因而他们本身并不等于管理，管理的核心在于对现实资源的有效整合。临床实验室有技术人员、检验设备、财力投入和检验信息等，如何将以上的资源有效整合利用是实验室管理工作的核心。
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临床实验室质量管理课件讲义
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3秒自动关闭窗口主题：【讨论】基质效应影响检测结果
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发表于： 17:47:54
基质效应影响检测结果，所以克服方法是基质加标，样品稀释，我不明白样品稀释是指少称样品还是多加溶剂，为何样品稀释可以消除基质效应。
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张老师也是专家级别了，我持续关注学习
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1.改变出峰时间。一般内源性物质极性大，先出。可以将待测物出峰时间拖后。2.换一下制样方法。3.如果LLOQ能做到，可以将样品稀释，这样的话基质也就被稀释了，基质效应也小了。
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基质效应问题一直是我们遇到的大问题，刚看到了，想和大家交流一下，我的几点建议是：1）最好是优化前处理方案，从根本上解决基质效应问题。如果是液液萃取，改用提取效率更高的提取剂；如果SPE估计关系不大；如果蛋白沉淀，更高的沉淀或稀释倍数，一般不建议改用无机盐，但得根据实际需要。另外，牵涉灵敏度能否达到的问题。2）优化色谱条件，一般的基质抑制主要是前沿峰里的混合物质，最好是检测物与前沿峰完全分离。当然了，可以增加一些提高信噪比的物质，这些需根据离子化加合的物质选择。也可以使用梯度洗脱，既可以减少前沿基质，又能提高信噪比。3）当然了，有些仪器可以通过特殊的方法专门考察一下基质效应所引响的区域，从三通阀处用针泵恒速进样检测物，用液相进样含基质的空白基质处理液，检测会看到基质抑质的倒峰。4）优化离子源参数，以实际响应的提高为标准。6）对于内源性基质抑制就很难处理了，要一步步去寻找根源和减少抑制。
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查到的基质效应的相关知识1 、基质（matrix） 尚无统一的解释，曾称为“一种分析物（analyte）的环境（milieu）”，即指标本中除分析物以外的一切组成。以血清胆固醇（Chol）测定而言，就是指Chol以外血清中的一切成分及其物理、化学性质。2、基质效应（matrix effect） 按NCCLS文件的定义，指（1）标本中除分析物以外的其他成分对分析物测定值的影响。（2）基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰。广义说来，基质效应也应包括已知的干扰物（如Chol测定中胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘度、pH等）的影响。3、基质偏差（matrix bias） 基质效应所致分析结果的偏差称为基质偏差。 用作校准物质或质控物的经过处理的混合血清，由于血清基质的理化性质在处理过程中的改变，在常规测定上往往出现基质偏差。 基质偏差的出现也与分析系统（包括方法、试剂及所用仪器设备）有关，所以有人将基质效应定性为方法、材料与基质的特异性反应。4、制备物（processed material） 用于血脂常规测定的校准液（calibrator）及用于技能对比试验（proficiency test，PT）或室间质量评价（EQA）的样品（如质控血清）。 以Chol测定为例，全酶法测Chol始于1974年，在此以前用化学反应测Chol时，除了一些已知的干扰因素外尚未提及基质效应问题。1979年才由Cooper指出Chol酶法中校准液与病人血清的反应性不同，可使Chol测定值偏低5%～7%。 1994年CAP调查570实验室时用了参考方法定值的新鲜冰冻血清为调查材料，15个同方法测定chol组中仍有11个组出现基质偏差，同时用制备物的4个组中，3个有基质偏差。 有的报告指出TG、HDL-C常规方法与CDC的参考方法比较，有明显偏差，甚至&10%。McNamura等发现血清冰冻可在免疫法（用apoAI与E抗体分离LDL）直接测定LDL-C时出现明显基质效应，血清冰冻保存2～26周后，LDL-C测定值平均偏低10%左右。 由于新鲜血清与冻干血清的apoAI测定值一致，显示冻干对apoAI测定不产生基质效应，故apoAI参考血清以冻干形式提供。但冻干对apoB有极明显的影响，在不同原理的免疫法中，基质偏差高达-26%～+4%，但这种变化也包括apoB分子本身的结构变化在内。所以apoB参考血清是液态冰冻保存的。5、减少基质效应的方法 ： Naito等（1993年）提出过减少基质效应的研究方向，至今仍有参考价值：改进室间质评样品，使其作用更像新鲜人血清。 改进仪器设计及试剂组成。 选择方法及方法学参数，使其适应性更强，且容易掌握，对制备物（校准物、室间质评样品与质控物）基质的确切性质不敏感。& & & 瞬间离子基体效应 moment ion matrix effect 离子的有效淌度受到周围离子的影响，由其周围离子所形成的包围圈，称为离子基体。如果样品组分从进样点到探测点迁移过程中，在某一时间间隔遇上一个不同组成的基体区带，这个离子基体区带就将对样品组分产生影响，使它们的淌度发生瞬时变化，从而选择性地影响溶质的迁移和分离，这就是瞬时离子基体效应。
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基质效应的评价医学和实验室职业团体以及公众，对生物液体测试准确度的关注增加了。适当的规则意味着提高了测试步骤的准确度。重新强调了在临床，参考和医生的官方实验室，用外部质量评价方案（EQAS）和内部测试（PT）来评价和监测测试的准确度的重要。目前的科学数据表明，由于基质效应，存在于许多外部控制材料中，这样的EQAS结果的使用并非总是可行的。这些处理过的材料（包括质量控制和定标材料）有时的表现不同于实验室日常分析的新鲜样本。新鲜的生物液体没有产生的偏差，在EQAS，控制和定标材料中经常见到。由于这些基质效应，用PT评价实验室测试准确度的性能可能导致不准确的结论和可能的不恰当管理批准。基质效应现象与分析测试中四种主要组成部分的相互作用有关：仪器设计，试剂配方，方法原理，控制，定标和PT材料的成分及处理技术。这些类别中的每一种都是对偏差的大小和方向（正向或负向）有贡献的因素。引起基质效应的相互作用是复杂的，并且由于学科（化学，血液学）和每种方法用于定标和监测特性的材料的本性不同而不同。可以料想到细胞悬浮液的性能特征与去蛋白滤过液不同。需要进行研究来定性这些干扰因素，以便设计仪器，试剂和液体最小化这些干扰。在那以前，方法的标准化和实验室测试准确度的评价和监测是困难的。本文件是EP7-临床化学的干扰测试的补充。它们在提供方案以帮助确定可能影响患者护理的误差来源和/或评价方法的适用性方面是相似的。它们在以下方面存在区别：1）EP14主要关注处理过的样本和患者样本件的差别，而EP7集中注意于特定的物质或条件如一种干扰物质的存在或粘性的改变，怎样改变了患者样本的结果。2）为了评价干扰的影响，EP14将处理过的样本与患者样本比较，而EP7在干扰增加量的存在中，用基于方法精密度和分析物的内部个体差异的标准。3）用于确定影响是否存在的标准，在EP14中取决于来自患者样本的结果在最适线周围的分布，而EP7用一系列包含已知的不同量的被研究物质（或条件变化）的相关混合物的重复性测定的不确定性。4）EP14将处理过的样本的相对偏差与患者样本比较，而EP7的目的是定量观察到的偏差，作为在特定分析物浓度的干扰物质（或其他特性）的浓度函数。
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基质效应的评价基于这样的原理，即观察到的反应与真实的活性或浓度间的关系取决于测试时的环境条件（如温度或基质）。因为没有测定技术是完全科学的，观察到的任意两种方法间的关系，取决于比较选择的样本。对临床实验室分析，设计方法是用来测定患者样本的浓度或活性，并且一组典型样本被用作比较的标准。基质效应的大小，用来自两种被比较方法的典型的患者样本的结果的分布的比较来评估。就干扰物质存在而言，样本越不同，可料想到数据越分散。在处理过的样本中测量到的偏差的大小，与患者样本的综合分散度比较。表示被评价方法测试的不确定性的这个残留的分散度应归因于两个因素：不精密度和非特异性。（本方案所用的回归技术使用如下假设，X轴表示的比较方法没有误差。）通过重复性测试减小不精密度的贡献，因此，在这些分析中，对分散度的主要贡献是因为那些已知或未知物质的固有干扰（这里称为基质效应）。分散的范围用预期间隔来表达，它评价了被评估方法对所有将被测试的患者样本的非特异性。然后可以断言，对于被测试的分析物用处理的样本表示患者样本是否具有合理的可能性；如果处理的样本的结果超出预期的间隔，则基质效应存在。另外，如果一系列处理过的样本是相关的（这是在EQAS或PT中的常见情况），例如，由普通收集物混合而准备，回归这些样本的结果和比较最适直线与预期间隔可被用作评价的均值。如果对所有相关的处理样本，基质效应偏差在预期的间隔内，但不是恒定的或显示一种关系，这个技术特别有用。来自本研究的任何结论都受处理过的样本的特定差异的限制，如生产批号，添加到样本中的分析物的来源，可能存在的稳定剂的来源等等。随后的研究可能需要确定观察到的偏差的来源。
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本方案需要下列材料：1）被评价方法的试剂，定标液和仪器系统。2）比较方法的试剂，定标液和仪器系统。使用处理过的定标液或控制样本时预期显示小的或没有基质效应的方法。按优先顺序排序，比较方法应当符合下列描述，例如：a） 国际参考系统（NRSCL）定义的方法（例如，胆固醇同位素稀释质谱分析法）；b）NRSCL参考方法（例如，胆固醇Abell-Kendall方法）；c）NRSCL认可设计的比较方法。d）特定分析物普通使用的方法。注意：尽管理想的比较方法应当没有基质效应，但这并不是绝对要求。从实践的原因来说，一个经常使用的临床方法可被选为比较方法。但是，当觉察到基质效应时，从方案中获得的信息仅说明患者样本和处理过的控制液在用两种方法测定一种特定分析物时没有产生可比较的结果。本方案不确定被评价方法还是比较方法具有更好的特异性。a）处理过的样本，例如，定标液，被研究的控制样本。b）浓度或活性大约均匀分布在感兴趣的处理过的样本的浓度范围的20个新鲜的患者样本。选择典型的用于分析的患者样本（例如，健康和患者样本），并且避免那些由于存在已知的干扰而被认为不适于分析的样本。如果冷冻不影响两种中任意一种方法的测定，也可包括冷冻样本。
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没做过血液，是不是血液中基质更复杂些。
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样品稀释后基质是小了，但农药的峰也小了，像有些样品的基质峰都集中在8min以前，这样凡是8min以前出的农药很难判断是基质还是农药。
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浓度越低基质效应肯定月底，稀释就是这个原因吧，但是稀释被测物质也随之降低，所以需要适当稀释。目标分析物筛选方法的技术要求(二)_医药保养_中国百科网
目标分析物筛选方法的技术要求(二)
    
3 特异性对于分析方法来说，方法的特异性就是区分分析物与相近物质(异构体、代谢物、降解产物、内源性物质、基质成分等)的能力。可以通过检查样品基质以及其他可能存在的干扰物对目标方法的干扰情况，从而验证目标方法的特异性。(1)样品基质方法验证时，按表6-12规定对方法涉及的每种样品类别最少需选择一种代表性样品基质进行空白样品测试，有条件的话建议分析一定数量的代表性空白样品(n≥20)。若采用色谱方法(包括色谱一质谱联用方法)，应在目标分析物预计出峰时间窗口(一般可选定5％)观察是否有基质干扰测定(是否有出现色谱峰)。当样品空白基质试验结果发现有干扰情况时，要对干扰情况进行分析判断：①可另找符合表6―12要求的代表性样品空白基质进行特异性试验，从而判断干扰原因是否空白样品含有目标分析物。②观察干扰物的测定特征．如质谱里的离子比或全谱、二极管阵列获得的紫外光谱等信息，判断干扰物与目标分析物是否相同；若空白样品没有含有目标分析物，即干扰物是空白样品的其他成分时，可通过改变仪器测定条件来消除这些干扰，如改变色谱的洗脱条件，选择另外的监测离子等方式。对于确实因技术原因不能去除的干扰，是否在可接受的范围。当实验室在方法验证试验中发现来自不同产品的同一种样品基质(如肌肉)有不同的基质效应时．应分别对相关的样品基质进行验证试验。(2)分析物选择与目标分析物化学结构相关的化合物(代谢物、衍生物等)或样品中可能存在的其他有关物质添加至代表性空白样品基质中进行测试，观察是否有干扰，且这些干扰会否导致定性错误或干扰定性、明显影响定量。对于发现的干扰可尝试采用改变仪器测定条件，如改变色谱的洗脱条件，选择另外的监测离子等方式来去除。4 检出限对于可显示基线噪声的仪器检测方法(如色谱法或色谱质谱联用法)，代表性空白样品基质的色谱图(或离子流图)中目标分析物出峰位置的基线噪声的三倍所对应的浓度为检出限(3倍信噪比)，注意不能用试剂空白的噪声来计算检出限，试剂空白计算出来的仅是仪器的检出限。并非检测方法的检出限。对于那些非仪器分析的目视方法，检出限是用已知浓度的目标分析物试验能被测可靠地检测出来的最低浓度或量。5．S定量限定量限(LOQ)是指采用添加法经检测方法规定的全过程能可靠地定量测出样品中目标分析物的最低浓度或量。对于采用可观察到基线的仪器检测法，一般取信噪比大干或等于10倍对应的浓度或量作为定量限。与检出限的规定一样的是，信噪比要采用样品基质来测，不能采用试剂空白的信噪比。对于已有官方管理限量或最大残留限量的物质，原则上检测方法的定量限加上样品在官方管理限量或最大残留限量处的标准偏差的i倍，不能超过官方管理限量或最大残留限量。对于不准使用或非法添加物质、禁用药物或农药，检测方法的定量限不能超过官方规定的检测限量或最低要求执行限(MRPL)。分析者应注意不是仅凭计算信噪比大于等于lO得出对应的分析物浓度或量就当是检测方法的定量限，检测方法的定量限对应的浓度水平应包含在方法的验证过程，如方法的正确度、精密度等指标的验证实验。6 线性范围通过制作目标分析物的校正曲线来检查方法的线性范围。(1)校准曲线的浓度水平校准曲线应充分涵盖检测所需的浓度区域，对于有官方管理限量或最大残留限量的物质，一般包括该限量的0．5倍、1．O倍、2．0倍所对应的浓度水平。建立校正曲线选定高低两端的浓度点时应充分考虑方法回收率的影响。对于分析关注的浓度范围，如禁用物质或非法添加物的检测低限(LOQ)。限用物质的管理限量(如MRL)对应的浓度水平处应适当增加浓度点。如校正曲线用于定量。那校正曲线至少包含5个浓度水平(不包括零点)。校正曲线的浓度范围应充分涵盖检测所需的浓度区域，建立校正曲线选定高低两端的浓度点时应充分考虑方法回收率的影响，即在低端处要考虑回收率小于100％，在高端处要考虑回收率大于100％。(2)校准曲线的相关系数校准曲线的拟合度．也就是通常说的相关系数。目前采用的仪器分析技术，校准曲线绝大部分(或经过数学转换)是采用最小二乘法进行线性回归拟合的．过去分析人员习惯说校准曲线的相关系数是3个9、4个9，实际上笼统地说多少个9，既不严谨，也可能带来不必要的实验室资源浪费。校准曲线的拟台度与拟合的置信水平、参与拟合的样本大小(浓度点数)有关，文献[16]给出了不同置信水平、样本大小对应的相关系数临界值(表6-13)。根据置信度“和自由度”2的值查出表中对应的值就是相关系数的临界值，相关系数大于这个值表示相关，小于这个值表示不相关。(3)校准曲线的偏离判断一个方法或实验的校准曲线是否可接受，除了相关系数外．还应观察参与线性拟合的样本(浓度)点是否存在过大的偏离情况，应通过绘图或视觉检查校正曲线的拟合程度．避免过于依赖相关系数．确信在残留检测的相应区域内校正曲线有满意的拟台。当检测的相应区域内有个别点偏离校正曲线超过20％，或在接近或超过最高残留限量对应的尝试区域偏离校正曲线超过lO％时，可以认为校准曲线是不可接受的，需重新建立一个校正曲线或重复检测。(4)校正曲线的基质匹配建立校正曲线时应充分考虑样品基质对分析物仪器响应值的影响。对于采用质谱仪作为检测器的方法，在方法验证时应进行仪器的基质效应试验，不同类型或型号的质谱检测器可能会有不同基质效应。当样品基质对分析物的仪器响应值有明显影响时，校正曲线应与样品基质匹配。(5)单点校正实际分析中有可能存在某些分析的目标物其在检测器上的响应会随时间发生变化．此时可允许采用单点校准法，不一定非要采用校准曲线法。对于某些分析物，其在检测器上的响应随时间而发生明显变化，那么频繁的、次数更多的单水平(单点)校正比次数较少的多水平校正曲线更能获得准确的结果。在采用单水平校正时．如果样品中分析物的含量超过最高残留限量，则样品的响应应在单点校准的标准响应的±10％范围内，如果样品中分析物的含量没有超过最高残留限量，则样品的响应应在单点校准的标准响应的±50％范围内。
收录时间:日 18:17:33 来源:北纳生物 作者:匿名
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