oligo7评价引物 dt 逆转录引物多少钱

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-10-14 07:11 标签： 逆转录需要引物吗
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【求助】random primer与oligo dt 有和区别？
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【求助】random primer与oligo dt 有和区别？
我是一个刚刚接触PCR的菜鸟，一时弄不懂random primer与oligo dt 有什么区别，还望各位前辈能多多指教，不甚感激！
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我只知道作RT时反映条件不同，万万不可搞混，其余的我也不清楚
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RT合成C DNA引物的选择一般有以下3种：
1 随机6具体引物：当特定M RNA含有使反转录酶终止的序列而难合成全长时可采用随机6具体引物来拷贝M RNA。用此引物合成的C DNA96%源与R RNA
2 oligo dt ：是一种对M RNA 特异的方法，因决大多数真核生物M RNA都有 POLY A结构，故仅M RNA被转录。做RT一般都用他做引物，特异性较强。
3 特异性引物：用含目标RNA的互补序列寡核甘酸做引物，可导致更为特异的扩增长物。
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我想顺便问一下：用随机6具体引物，反转录出mRNA 吗？另外它的序列是什么？
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我用的大连宝生物的试剂合，他的是 RANDOM 9 MERS 适应于长的或具有HAIRPIN结构的RNA，包括R RNA，M RNA，T RNA等在内的所有RNA的RT。
他的序列是 5 NNNNNNNNN3
不知解释的如何，我也是看说明书的，希望对你有帮助！
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个人经验，这两个引物的应用是有讲究的，主要根据RNA质量来决定如何选择。
随机引物由于与RNA的很多地方可以结合，因此对于一些即使已经降解的RNA仍然能够逆转录，具有高敏感性和较低的特异性，特别是当有基因组DNA污染时则不能用随即引物。因此对于RNA抽提质量有部分降解的可以选择用随即引物或合用oligdT。
oligdT则只能与RNA 的3‘端多聚A结合，因此有较高的特异性，但对于那些5’端部分降解的RNA序列则不能完成逆转录。这样在你PCR引物设计在靠近5‘端的目的基因就很可能扩增不出来。因此对于RNA基本无降解的建议用oligdT，已有降解的则用随机引物较好。
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随机核苷酸引物的原理是这样的：
拿随机六核苷酸引物来说，六个核苷酸每个位置都有四种选择，分别为A,G,T,C,那么六核苷酸的序列理论上来说就有4的6次方种可能，因此六核苷酸引物没有固定的序列，而是4的6次方条序列的总和，在说得明白一点，六核苷酸引物的EP管中装的是4的6次方条核苷酸序列！！！
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我也在思考这个问题，看了这个之后，我理解的更加深刻和清楚了，谢谢各位。RT-PCR逆转录时随机引物和oligo dt 能同时使用吗(随机引物,逆转录,RT-PCR,引物) - PCR实验 - 生物秀
标题: RT-PCR逆转录时随机引物和oligo dt 能同时使用吗(随机引物,逆转录,RT-PCR,引物)
摘要: [RT-PCR逆转录时随机引物和oligo dt 能同时使用吗(随机引物,逆转录,RT-PCR,引物)] RT-PCR逆转录时随机引物和oligo dt 能同时使用吗？什么情况下需要同时使用。另外如果在逆转时，用特异性引物，在接下来进行PCR时可以用同一种引物吗？ 关键词:[逆转录 随机引物 RT-PCR 引物 特异性引物 逆转]……
RT-PCR逆转录时随机引物和oligo dt 能同时使用吗？什么情况下需要同时使用。另外如果在逆转时，用特异性引物，在接下来进行PCR时可以用同一种引物吗？
回复顶一个！我也很困惑。。。为什么逆转录盒里有oligo(dt) primer 又有random hexamer primer？还有所谓的gene-specific primer又是什么东东？？求解~~回复可以混用，看实验需求。回复顶一个！我也很困惑。。。为什么逆转录盒里有oligo(dt) primer 又有random hexamer primer？还有所谓的gene-specific primer又是什么东东？？求解~~oligo 是用于逆转录RNA得到全长基因的c。gene specific primer就是你逆转录后做PCR扩增目的片段时用的目的基因的下游引物。回复oligo 是用于逆转录RNA得到全长基因的c。gene specific primer就是你逆转录后做PCR扩增目的片段时用的目的基因的下游引物。谢谢你的回答！我想再问下：为什么逆转试剂盒里说的是逆转录时加oligo或gene specific primer呢？如果加后者，那PCR时就不用加下游引物了吗？谢谢~
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【求助】lncRNA逆转录
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各位战友，想请教一下应用二步法qRT-PCR检测lncRNA水平过程中，第一步lncRNA逆转录成cDNA采用什么引物：随机引物? Oligo dT?还是针对该lncRNA的特异性逆转录引物？有些观点认为随机引物和/或Oligo dT就行，有些观点则认为特异性逆转录引物效果更好。请问如何选择，非常感谢！
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为何不买试剂盒？？
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您好！我用的是takara的试剂盒【PrimeScript? RT Master Mix (Perfect Real Time)】，试剂盒中的RT Master Mix中包含了Oligo dT Primer和Random 6mers，用试剂盒逆转录后得到cDNA，康为公司的普通PCR试剂进行PCR能得到目的产物。但是我对逆转录这一步存在一些疑问，用试剂盒（包含Oligo dT Primer和Random 6mers）逆转录和用基因特异性引物（GSP）进行逆转录相比，两者后续qPCR检测lncRNA水平的实验结果有否差异？非常感谢！
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对于二代测序的结果必须经过验证后进行qPCR,那么从我们目前做的实验服务结果看，有带A尾的和不带A尾的2种LncRNA.有带A尾的，用oligo dt做引物。不带A尾的用随机引物。
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