293细胞转染操作方法_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
293细胞转染操作方法
上传于||文档简介
&&H​E​K​ 9T​细​胞​的​高​效​快​速​转​染​。​
​
​
​
​病​毒​包​装​的​转​染​。
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
定制HR最喜欢的简历
你可能喜欢体内转染的操作方法和步骤_生命科学吧_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0成为超级会员，使用一键签到本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：2,833贴子：
体内转染的操作方法和步骤收藏
下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。2.转染试剂的稀释。取25μl的EntransterTM-in vivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。3.转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，立即充分振荡混匀。4. 室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。5. 动物注射。说明：1).尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到阻力和轻微隆起，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。2).2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量，这样效果更好。3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。6. 基因表达检测。一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。7. 长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
登录百度帐号推荐应用
为兴趣而生，贴吧更懂你。或哪种RNA转染试剂效果更好？ Turbofect or EntransterTM-R4000？_生命科学吧_百度贴吧
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&签到排名：今日本吧第个签到，本吧因你更精彩，明天继续来努力！
本吧签到人数：0成为超级会员，使用一键签到本月漏签0次！成为超级会员，赠送8张补签卡连续签到：天&&累计签到：天超级会员单次开通12个月以上，赠送连续签到卡3张
关注：2,833贴子：
哪种RNA转染试剂效果更好？ Turbofect or EntransterTM-R4000？收藏
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen Biosystem Co,Ltd）待处理细胞：human CD8+T 细胞1.针对Turbofect转染的方法每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。取0.5μLagomir，加入9.5μL无血清RPMI1640，充分混匀；取0.2μL Turbofect transfection reagent和agomir稀释液充分混合。转染复合物制备完成； 混匀后室温下孵育15-20分钟，直接取10μL加入已铺好细胞的孔中，继续培养24h收取细胞，用PBS洗涤3次以上，以备RNA抽提。 转染Mix的配制： 100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL无血清的RPMI1640）×2.5=1.25+0.5+23.252.EntransterTM-R4000转染每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。取0.5μLagomir，加入9.5μL无血清RPMI1640，充分混匀，制成10μLagomir稀释液；取0.25μL EntransterTM-R4000，然后加入9.75μL无血清稀释液体，充分混匀，制成10μLEntransterTM-R4000稀释液；将EntransterTM-R4000稀释液和agomir稀释液充分混合（可用振荡器或加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成；将20μL转染复合物加入孔中的细胞悬液中，前后移动培养皿，混合均匀；转染后6h观察细胞状态，并更换培养基，继续培养24 h后收取细胞，用PBS洗涤3次以上，以备RNA抽提。转染Mix的配制：100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+9.5μL无血清的RPMI1640）×2.5=1.25+23.75；Etranster稀释液：（0.25μLEtranster+9.75μL无血清的RPMI1640）×5=1.25+48.75（室温静置5分钟），取20μL至ago和N.C.管中，室温静置15分钟。 实验结果
结论：从目的miRNA表达水平的检测结果来看，转染24 h后，英格恩生物公司（EngreenBiosystem）的EntransterTM-R4000 (ago/NC:422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂 (ago/NC: 285870倍)。 讨论：从实验结果来看，英格恩生物公司（Engreen Biosystem）的EntranstenTM-R4000(ago/NC: 422912倍)转染试剂的效果优于Turbofect转染试剂 (ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物（EngreenBiosystem）最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA，而且针对mRNA等长链RNA优化。该试剂可将RNA导入多种细胞系，包括原代细胞和悬浮细胞。无论有无血清、抗生素存在均可获得很高的转染效率。
确实不错，我们实验室之前用的是lipo2000，但感觉细胞毒性大，转染效率低，而且价格很贵。现在我们都换成了英格恩生物的转染试剂，效果非常好！
登录百度帐号推荐应用
为兴趣而生，贴吧更懂你。或Entranster-in vivo应用文献
简介： 这是部分的文献，附件有部分全文。
1.Matrix Biol. 2013 Mar 5.Transdermal siRNA-TGFβ1-337 patch for hypertrophic scar treatment.(皮肤涂抹siRNA研究治疗皮肤瘢痕)
2.J Cereb Blood Flow Metab. 2013 Jan 9.SirT1 mediates hyperbaric oxygen preconditioning-induced ischemic tolerance in...
大小：5606.0 KB需要消耗0个丁当
已有75252位站友通过上传文件赚到了2607008个丁当
压缩包内文件:
相关推荐文档
（请与我们联系：微信号dingxiangwang 或点此扫一扫）
该文档由会员上传，版权问题请查看
丁香园文件上传协议
丁香文档是供丁香园网友在线分享文章、书籍、课件、图片、视频、软件等资源的开放平台，为网友提供的信息存储空间。平台上所累积的文档均来自热心用户的积极上传。丁香园未经授权不编辑或修改用户上传的文档。对于用户上传的文档内容之真实性引发的全部责任，由用户自行承担。丁香文档的用户不能侵犯包括他人的著作权在内的知识产权以及其他权利。一旦由于用户上传的文档、书籍、视频等发生权利纠纷或侵犯了任何第三方的合法权益，其责任由用户本人承担，因此给丁香园或任何第三方造成损失的，用户应负责全额赔偿。
丁香文档用户不得侵犯包括他人的著作权在内的知识产权以及其他合法权利。如果由于用户上传的文档、视频等未经著作权人同意擅自对他人的作品进行全部或部分复制，修改，改编，翻译，汇编等，有可能侵害到他人的著作权时，不得把相关内容上传发布到丁香文档。
丁香文档的用户可以为介绍、评论、研究等目的，在合理的范围内适当引用他人已经发表的作品，但应当注明作者姓名、作品名称，并不得侵犯著作权人及其他权利人的合法权益。
用户需承诺其所上传的所有文档、视频等内容符合中国法律法规和规范性文件的相关规定，不侵犯任何第三方的合法权益。如用户违反前述保证，丁香文档有权删除相关文档内容，并可以暂停或终止向该用户提供服务。
对于用户上传到丁香文档上的任何内容，用户同意丁香园在全世界范围内享有免费的、永久的、不可撤销的、非排他性的使用和再许可的权利。丁香园享有修改、复制、发行、展览、信息网络传播、改编、翻译、汇编等权利。同时，对于用户上传到丁香文档内容的侵权行为，用户授权丁香园在全世界范围内进行维权。
如因丁香文档用户上传的内容侵犯了第三方的合法权利，第三方向丁香园提出异议，丁香文档有权删除相关的内容。
用户从丁香文档中获得的信息，未经事先许可，用户不得以盈利为目的自己或提供给第三方进行使用（符合法律规定的“合理使用”条件的除外）。否则，一切法律后果由该用户或第三方自负，与丁香园无关。
未经丁香园公司事先许可，禁止使用任何机器人、蜘蛛、其他自动设备，或手动程序来监视或复制丁香文档网页或其所包含的任何内容。否则，丁香园有权依法追究法律责任。
本协议未涉及的问题参见国家有关法律法规。当本协议与国家法律法规冲突时，以国家法律法规为准。
本网站之声明以及其修改权、更新权及最终解释权均属丁香园网站所有。丁香园有权根据互联网的发展和中华人民共和国有关法律、法规及规范性文件的变化，不断修改和完善相关条款。任何未尽事宜，请与我们联系：微信号dingxiangwang 或点此扫一扫
请选择举报原因
资源侵权（该资源侵犯我个人或公司的权益)
病毒资源（该资源有病毒）
名不副实（该资源标题与实际文件不相符）
广告（文件中有大量广告链接）
其他，请输入
关于丁香园